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反义hTERT抑制恶性胶质瘤生长的体内外研究
目的 探讨腺病毒介导的反义hTERT在体内外对恶性胶质瘤细胞生长的影响.方法 构建含有hTERT反义序列的腺病毒载体在体内外转染恶性胶质瘤细胞系U251,检测肿瘤细胞生长情况、细胞周期变化、端粒酶活性、hTERT蛋白表达等.结果 腺病毒介导的hTERT反义治疗在体外明显抑制肫瘤细胞生长,增殖减慢,凋亡增多,细胞较多聚集在G1/G0期,转染后第6天细胞生存率为46.9%,端粒酶活性和hTERT蛋白表达都明显下降,在体内实验中肿瘤生长明显减慢.结论 腺病毒介导的反义hTERT在体内外能明显抑制恶性胶质瘤细胞的生长.
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反义hTERT在体外对HL-60细胞的抑制作用
[目的]探讨反义hTERT表达质粒是否能够抑制HL-60细胞增殖能力及端粒酶活性.[方法]通过脂质体法将反义hTERT表达质粒导入HL-60细胞中;以G418进行筛选得到阳性克隆;以MTT法和体外集落形成实验检测反义hTERT表达质粒对HL-60细胞增殖的抑制作用;以TRAP-PCRELISA法来研究反义hTERT对HL-60细胞的端粒酶活性的抑制作用.[结果]转染反义hTERT表达质粒组与空白对照及空质粒组相比,细胞增生速度明显较慢,克隆形成能力明显下降(P<0.01);反义hTERT对HL-60细胞的端粒酶活性具有明显的抑制作用.[结论]本研究构建的端粒酶反义hTERT表达质粒能够抑制HL-60细胞的体外增殖能力及其端粒酶活性.
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反义hTERT对人肺巨细胞癌细胞系端粒酶活性的抑制作用
背景与目的:近几年的研究表明,端粒酶在肿瘤的发生中扮演着重要角色.人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse trascriptase,hTERT)是端粒酶活化的惟一限制性组分.本研究探讨hTERT全长cDNA反义序列转染对人肺巨细胞癌细胞系PLA-801D恶性表型的逆转作用.方法:应用基因重组技术构建包含hTERTcDNA全长序列的反义hTERT真核表达载体pcDNA3.1(-)-hERT,用脂质体转染人肺巨细胞癌细胞系PLA-801D,通过生长曲线比较转染反义hTERT后PLA-801D细胞的增殖能力,应用逆转录-聚合酶链反应方法检测hTERT mRNA的表达水平,并应用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附法检测端粒酶活性.结果:成功地构建了pcDNA3.1(-)-hTERT的反义真核表达载体,并转入到PLA-801D细胞中.转染反义hTERT的细胞较未转染及转染空质粒细胞的生长增殖能力显著降低(P＜0.05);转染组细胞中野生型hTERT mRNA的表达被抑制,其相对表达量仅为对照组细胞的15.7%,转染组细胞中端粒酶活性较对照细胞下降了约82.4%.结论:hTERT cDNA的全长反义序列可以抑制PLA-801D细胞hTERT mRNA的表达水平和端粒酶活性,限制PLA-801D细胞的生长.
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反义hTERT体外抑制白血病细胞增殖的研究
目的研究反义hTERT基因对白血病细胞体外增殖的抑制作用.方法体外通过SuperFect将已构建好的正、反义hTERT真核表达载体转染HL60白血病细胞,再经过G418及PCR筛选鉴定分别转入了正、反义hTERT载体的抗性克隆细胞HL60-s和HL60-as.随后运用实时荧光定量RT-PCR技术及TRAP-银染法对各组细胞内源性hTERTmRNA的表达情况及端粒酶的活性进行检测.同时还采用MTT法、双层软琼脂克隆形成试验、流式细胞术观察和分析反义hTERT对白血病细胞体外生长增殖活力的影响及是否能诱导瘤细胞的凋亡.结果与空白对照、正义hTERT组相比,反义hTERT能显著地降低HL60细胞内源性hTERT mRNA的表达(P＜0.01)和下词端粒酶活性.当各组细胞传至第25代后,与HL60、HL60-s比较,HL60-as细胞的生长速度和集落形成能力明显地减慢和降低,同时伴有凋亡率的显著增加.结论反义hTERT在体外能抑制白血病细胞的生长增殖能力,其潜在、广谱的抗肿瘤作用的分子生物学机制可能是首先通过抑制和下调hTERT表达(端粒酶活性)而终引发瘤细胞衰亡的途径来实现的.
关键词： 反义hTERT 白血病 实时荧光定量RT-PCR 细胞增殖 分子生物学治疗 -
反义hTERT基因对K562细胞凋亡及周期的影响
目的:探讨反义hTERT基因抑制K562细胞端粒酶活性对其细胞周期及增殖的影响.方法:用脂质体介导反义hTERT基因和空载体质粒转染K562细胞株,绘制生长曲线,MTT法检测细胞活性,血清饥饿法同步化细胞周期,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率变化.结果:反义hTERT基因转染后,细胞生长明显受到抑制.细胞同步化后,流式细胞仪检测显示:KA组细胞出现早期凋亡峰,细胞阻滞于S期.但正常培养48h,各组细胞无明显凋亡,周期无显著差异.结论:反义hTERT基因可明显抑制K562的增殖,细胞同步化后具有促凋亡作用.
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反义hTERT对K562细胞端粒酶活性及细胞增生的影响
目的:观察反义hTERT表达质粒转染K562细胞后是否能够抑制端粒酶活性及K562细胞的增生.方法:质粒的构建与转染:将290 bp hTERT cDNA片段,反向连接于pLNCX-neo质粒上得到反义hTERT基因表达质粒.在体外转染中通过脂质体法将质粒导入K562细胞中,以G418进行筛选得到阳性克隆;以MTT法和形态学法检测反义hTERT表达质粒对K562细胞增生的抑制作用;以TRAP-PCR ELISA法来研究反义hTERT基因对K562细胞的端粒酶活性的抑制作用.结果:转染反义hTERT表达质粒组与对照组(空白对照及空质粒组)相比较,生长速率明显变慢,部分细胞出现凋亡等形态学改变.反义hTERT对K562细胞的端粒酶活性具有明显的抑制作用.结论:研究构建的端粒酶反义hTERT基因表达质粒转染到K562细胞中后,能够封闭K562细胞hTERT-mRNA的表达,在抑制端粒酶活性的同时,减慢了K562细胞的生长速度.
