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贲门癌患者外周血人类端粒酶反转录酶及基质金属蛋白酶-7 mRNA表达的临床意义
目的 分析人类端粒酶反转录酶(hTERT)及基质金属蛋白酶-7(MMP-7)mRNA在贲门癌患者外周血中的表达.方法 采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测157例贲门癌患者术前血液标本中MMP-7 mRNA和hTERT mRNA表达,对其表达与临床病理参数的关系进行比较.对无转移的81例患者术后6、12个月进行随访,根据患者临床症状、体征相应检查,判断复发转移.并将MMP-7 mRNA和hTERT mRNA表达阳性组与阴性组复发转移情况进行比较.结果 157例贲门癌患者中,hTERT阳性表达73例(46.0％)；MMP-7阳性表达61例(38.8％).hTERT、MMP-7表达与性别(x2值为2.597、0.199)、年龄(x2值为4.314、0.073)等因素无相关性(均P＞0.05),但与TNM分期(x2值为10.624、14.530)、有无远处转移(x2值为7.294、12.824)及组织的分化程度(x2值为12.003、6.482)之间存在相关性(均P＜0.05).术后随访6、12个月肿瘤转移率比较差异有统计学意义(P＜0.05).血行微转移阳性患者术后12个月肿瘤转移概率是阴性患者的6.12倍(OR=6.120).结论 贲门癌患者外周血hTERT及MMP-7mRNA的异常表达与贲门癌的发展和转移有关,血液微转移检测对贲门癌早期发现及预后具有重要意义,值得进一步研究.
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结直肠癌患者外周血人类端粒酶反转录酶及基质金属蛋白酶-7 mRNA的表达及其相关性研究
目的 应用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测结直肠癌患者外周血中人类端粒酶反转录酶(hTERT)及基质金属蛋白酶-7(MMP-7)mRNA的表达情况,探讨其对监测结直肠癌血液微转移的临床意义及二者的相关性.方法 采用TRIzol法提取血液标本中的总RNA,将其反转录成cDNA,然后用RT-PCR技术检测血液标本中MMP-7 mRNA和hTERT mRNA表达,计算样本的△Ct值.结果 在181例结直肠癌患者中,hTERT mRNA表达阳性63例,阴性118例.MMP-7 mRNA表达阳性61例,阴性120例.不同性别、不同年龄的结直肠癌患者外周血hTERT、MMP-7 mRNA表达阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).低分化腺癌患者MMP-7 mRNA表达阳性率(43.9％)较中高分化腺癌(27.8％)增高(x2=4.873,P＜0.05).Ⅲ、Ⅳ期患者外周血hTERT mRNA表达阳性率(42.5％)较Ⅰ、Ⅱ期患者(24.0％)增高(x2=6.591,P＜0.05).Ⅲ、Ⅳ期患者外周血MMP-7 mRNA表达阳性率(39.6％)较Ⅰ、Ⅱ期患者(25.3％)增高(x2=4.014,P＜ 0.05).有远处转移的结直肠癌患者外周血hTERT mRNA表达阳性率(53.3％)较无远处转移的患者(28.7％)增高(x2=9.059,P＜ 0.05).有远处转移的结直肠癌患者外周血MMP-7 mRNA表达阳性率(46.7％)较无远处转移的患者(29.4％)增高(x2=4.506,P＜0.05).CEA阳性患者外周血hTERT mRNA表达阳性率(52.6％)较CEA阴性的患者(30.1％)明显增高(x2=6.735,P＜ 0.05).CEA阳性患者外周血MMP-7 mRNA表达阳性率(60.5％)较CEA阴性的患者(26.6％)明显增高(x2=15.490,P＜0.05).无远处转移的结直肠癌患者中,以hTERT、MMP-7 mRNA一项高于正常值范围为血液微转移表达阳性.检测后6个月微转移表达阳性组肿瘤复发转移率(36.58％)与阴性组(7.14％)比较增高(x2=13.027,P＜0.05)；检测后12个月微转移表达阳性组肿瘤复发转移率(68.29％)与阴性组(12.5％)比较增高(x2=31.948,P＜ 0.01).至检测12个月后,微转移表达阳性组41例患者中28例出现复发转移,微转移表达阴性组56例患者中7例出现复发转移.联合检测的敏感度80.00％,特异度79.03％.Spearman相关性分析结果表明,hTERT与MMP-7mRNA呈正相关(r=0.341,P=0.000).结论 联合检测结直肠癌患者外周血hTERT、MMP-7 mRNA的表达,对早期发现血液微转移及预后具有重要意义.
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RNA干扰下调hTERT表达对宫颈癌细胞增殖及侵袭能力的影响
目的 观察RNA干扰下调人类端粒酶反转录酶(hTERT)表达对宫颈癌HeLa细胞增殖及侵袭能力的影响.方法 针对hTERT基因设计两对siRNA片段,瞬时转染人宫颈癌HeLa细胞;采用RT-PCR、Western印迹法检测转染后HeLa细胞hTERT在mRNA水平和蛋白水平的表达变化;PCR-TRAP法检测细胞端粒酶活性;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力变化;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;transwell实验检测细胞运动侵袭能力.结果 RT-PCR及Western印迹法结果显示,hTERT-siRNA能有效下调hTERT在mRNA和蛋白水平的表达,抑制效率分别为(85.8±3.26)％、(97.5±3.72)％;RNA干扰下调hTERT基因表达后,HeLa细胞端粒酶活性抑制效率为75.5％,增殖受到明显抑制(P＜0.05);流式细胞仪检测结果显示,处于Go/G1期细胞增多,由(58.18±3.76)％上升到(68.97±4.01)％(P＜0.05);未处理组细胞凋亡(4.14±0.79)％,hTERT-si-RNA组细胞凋亡(8.1±1.22)％,细胞凋亡率增加(P＜0.05).transwell实验检测结果显示,细胞运动侵袭能力下降约30％ (P ＜0.05).结论 hTERT-siRNA可有效下调hTERT在人宫颈癌HeLa细胞中的表达,抑制HeLa细胞生长并降低其侵袭能力.
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初治急性淋巴细胞白血病患儿外周血人类端粒酶催化亚单位表达与细胞因子网络紊乱的关系
目的 探讨初治急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿外周血人类端粒酶催化亚单位(hTERT)表达水平和细胞因子网络紊乱及二者的关系.方法 采集36例初治ALL患儿和13例健康儿童的外周静脉血2 mL,采用ELISA分别检测各组血浆IL-6和IFN-γ水平,t检验分析ALL和健康对照组IL-6和IFN-γ水平变化.采用半定量反转录.聚合酶链反应(RT-PCR)检测24例初治ALL患儿、13例健康儿童外周血和阳性对照K562细胞株hTERT相对表达水平,t检验比较分析初治ALL与健康对照组和阳性对照K562细胞株之间hTERT相对表达水平的差异.进一步采用Pearson直线相关分析初治ALL患儿组hTERT相对表达水平与血浆IL-6和IFN-γ水平的关系.数据处理采用SPSS 11.5软件.结果 仞治ALL患儿血浆IL-6水平明显高于健康对照组[(73.27±32.05)ns/L vs(28.15±15.91)ng/L,t=4.841 P=0],但血浆IFN-γ水平低于健康对照组[(14.62±7.67)ng/L vs(24.22±10.43)ng/L,t=3.505 P=0.001].初治ALL患儿组外周血hTERT表达水平明显高于健康对照组(0.6057±0.1796 vs 0.0774±0.0219) ng/L,t=4.986 P=0,低于阳性对照K562细胞株(0.6057±0.1796 vs 0.8883±0.0472)ng/L,t=3.071 P=0.006.初治ALL患儿组中外周血hTERT表达水平与血浆IL-6水平呈正相关(r=0.683 P=0.001),与血浆IFN-γ水平呈负相关(r=-0.570 P=0.011).结论 初治ALL患儿hTERT表达水平明显上调,并存在细胞因子网络紊乱,二者相互作用,促进ALL的发生发展.
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结直肠癌患者人类端粒酶反转录酶mRNA的表达及影响因素
目的 观察结直肠癌患者人类端粒酶反转录酶(hTERT) mRNA的表达,并分析其影响因素.方法 分析在我院接受治疗的80例结直肠癌患者,同时选取80例健康成年人的临床资料作为对照.观察两组患者结直肠组织hTERT mRNA表达,比较不同临床病理特征的结直肠癌患者结直肠组织hTERT mRNA的表达,分析影响结直肠癌患者hTERT mRNA表达的影响因素.结果 结直肠癌患者的结直肠组织hTERT mRNA阳性表达率为87.50％,明显高于正常对照组(6.25％);有腹腔淋巴结转移、组织学分型为管腺癌、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期、分化程度为中低分化的结直肠癌患者其结直肠组织hTERT mRNA阳性表达率较高(x2=4.068、4.898、8.447、6.154;P=0.044、0.027、0.004、0.013),而不同年龄、性别、肿瘤部位和大小的结直肠癌患者结直肠组织hTERT mRNA阳性表达率比较,差异无统计学意义(x2=2.593、0.258、0.878、0.152、1.755;P=0.107、0.612、0.349、0.696、0.185);有无腹腔淋巴结转移、组织学分型是影响结直肠癌患者结直肠组织hTERTmRNA阳性表达率的危险因素,其比值比(OR)分别为4.115和3.985.结论 结直肠癌患者结直肠组织hTERT mRNA的阳性表达率较高,且与患者是否存在淋巴结转移、肿瘤分期和组织分型密切相关.
关键词： 结直肠癌 人类端粒酶反转录酶 Logistic回归分析
