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Notch3的表达与乳腺癌发生发展的关系
Notch受体家族是一类高度保守的I-型跨膜糖蛋白,除了调节细胞的分化、增殖、自我更新和生存外,在决定细胞命运中起着重要的作用.Notch3基因是在哺乳动物中发现的第三个Notch家族成员,因此命名为Notch3基因,起初描述是表达在增殖的神经上皮细胞上[1],它的异常可导致伴有皮质下梗死及白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病(cerebral autosomal dominant arteriopathy with subcortical infarcts and leukoencephalopathy,CADASIL),一种可致中风和痴呆的遗传性小血管脑病[2].
关键词： 乳腺肿瘤 糖蛋白类 Notch3受体 Notch3信号通路 -
Notch3在肿瘤发生发展中的作用
Notch信号通路是一个高度保守的信号通路，在脊椎动物发育过程中扮演重要角色。研究发现Notch受体介导的信号通路在多种肿瘤中异常表达。近年来研究表明Notch3与多种肿瘤的发生发展有着密切的联系，Notch3在调控肿瘤细胞的凋亡、增殖和分化中起着重要作用，本文就Notch3在各类常见肿瘤中的研究进展进行综述，重点探讨Notch3异常表达与肿瘤形成、发展的分子机制，以期推动Notch3作为药物作用靶点的研究。
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TGF-β1通过TRAF6活化Notch3信号通路促进卵巢癌细胞迁移和侵袭的研究
背景与目的:转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)与Notch3在卵巢肿瘤组织中的异常表达与扩增分别与肿瘤转移和患者的低生存率有关.尽管TGF-β1与Notch3信号通路的交互作用促进多种肿瘤细胞的侵袭和转移,但其具体机制尚存在争议.该研究通过体外细胞学实验,探究TGF-β1与Notch3信号通路对卵巢癌细胞生物学行为的影响及其可能的相互作用机制.方法 :以上皮性卵巢癌细胞Hey A8和Hey为细胞模型,用ELISA检测培养上清液中TGF-β1的表达;分别用500 ng/mL TGF-β1中和抗体(对照组)、10 ng/ mL TGF-β1、50 μmol/L DAPT、10 ng/mL TGF-β1和50 μmol/L DAPT、50 μmol/L TRAF6多肽抑制剂、10 ng/mL TGF-β1和50 μmol/L TRAF6多肽抑制剂处理细胞,采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测各处理组TGF-β1和 Notch3信号通路分子以及TRAF6蛋白表达水平的变化;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、划痕实验和Transwell小室测定各处理组细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化.结果 :Hey A8和Hey细胞培养上清液中 TGF-β1浓度随时间延长而明显增加;与对照组相比,TGF-β1处理组Notch3-ICD、Hes1表达增加,Notch3抑制剂DAPT与TGF-β1共同处理组Notch3-ICD、Hes1表达水平无明显变化,TGF-β1明显促进细胞增殖、迁移和侵袭,Notch3抑制剂DAPT削弱了TGF-β1对卵巢癌细胞的促增殖、迁移和侵袭能力,说明TGF-β1通过激活Notch3信号通路促进卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭;进一步研究发现,TGF-β1激活Notch3信号通路的同时上调TRAF6表达,特异性抑制TRAF6能够抑制TGF-β1对Notch3信号通路的激活作用.结论 :TGF-β1可能通过TRAF6活化 Notch3信号通路,从而促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力.
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桃红四物汤对鼠血管吻合模型Notch3受体及VEC增殖影响的研究
目的:观察桃红四物汤对大鼠尾血管吻合模型Notch3受体及血管内皮细胞(Vascular Endothelial Cell,VEC)增殖的影响.方法:将40只实验大鼠适应性喂养1周后随机分为4组,即桃红四物汤组、生理盐水组、假手术组和空白对照组,每组10只.桃红四物汤组和生理盐水组造模后干预,假手术组切开显露血管后直接缝合,空白对照组不做处理,并于术后第2天和第5天两个时间点随机选取5只大鼠,采用脊椎脱臼法处死,切取血管吻合区血管,利用免疫组化检测Notch3的表达情况,并对大鼠外周血分离、获取单个核细胞,进行体外细胞培养,反复纯化后利用MTT法检测VEC增殖情况.结果:桃红四物汤组血管吻合区Notch3蛋白表达含量明显高于生理盐水组、假手术组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);桃红四物汤组VEC增殖明显高于生理盐水组、假手术组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:桃红四物汤能上调血管吻合区血管新生相关因子Notch3受体的表达,能够促进血管内皮细胞的增殖,从而促进血管的成活.
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Notch3受体在非小细胞肺癌中的表达
目的 研究Notch3受体在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况,探讨Notch3受体与NSCLC发病的相关性.方法 外科手术切除后由病理确诊为NSCLC 80例患者(临床病理资料完整,术前未经放、化疗及其他抗肿瘤治疗)的肺癌组织,40例正常肺组织(为癌旁距离肿块边缘5 cm以上、经病理HE染色证实为正常的肺组织),免疫组织化学SP法检测肺癌组织及癌旁正常肺组织中Notch3受体的表达.结果 NSCLC肺组织中Notch3受体水平明显高于对照组(χ2=19.937,P<0.01);Notch3受体水平与患者性别,年龄,组织类型(肺腺、鳞癌)无相关性(P>0.05);TNMⅢ+Ⅳ期中Notch3受体水平阳性率为73.3％,TNMⅠ+Ⅱ期阳性率为44.0％,差异有统计学意义(χ2=6.519,P<0.05);有淋巴结转移患者的Notch3受体阳性表达率为84.2％,无淋巴结转移患者的阳性率为28.6％,差异有统计学意义(χ2=24.953,P<0.05).结论 Notch3受体的表达水平与NSCLC的TNM分期、淋巴结转移密切相关,Notch3受体参与了NSCLC的发病及进展,对NSCLC患者的疾病进展及预后有重要意义;同时,阻断其表达有望成为NSCLC靶向治疗的新靶点.
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胞外Y-盒结合蛋白1通过Notch3受体促进肝癌细胞HepG2的增殖与转移
目的 阐明应激状态下肝癌细胞HepG2是否主动分泌Y-盒结合蛋白1(YB-1),并初步探讨胞外YB-1的病理意义与作用机制. 方法 浓度梯度的脂多糖(LPS)、阿霉素刺激处理HepG2,离心收集培养上清液,采用已建立的化学发光免疫分析法(CLIA)实时定量检测上清液中YB-1水平;免疫共沉淀技术检测胞外YB-1是否特异结合Notch3受体,Western blot分析Notch-跨腹受体表达;浓度梯度的重组YB-1与HepG2共培养,四甲基偶氮唑盐法与细胞迁移实验检测HepG2细胞的增殖与侵袭转移.多组间数据比较采用单因素方差分析. 结果 CLIA检测结果显示培养液上清液中胞外YB-1水平显著高于对照组(F=10.54,P＜0.001),分泌表达量在刺激培养(LPS:8 ng/ml和阿霉素:10 ng/ml)4 h后达高峰;免疫共沉淀与Westem blot结果证实胞外YB-1特异结合并上调表达Notch3;四甲基偶氮唑盐法与细胞迁移实验表明胞外YB-1显著促进HepG2细胞的增殖与侵袭转移(F=9.405,P＜0.001).结论 化疗药物等应激状态下肿瘤细胞HepG2可经非经典途径主动分泌YB-1,胞外YB-1特异结合并上调表达Notch3受体,进而促进HepG2细胞的增殖与侵袭转移.为阐明肝细胞肝癌发病机制及进一步探讨胞外YB-1与恶性肿瘤的生物学关系奠定了基础.
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肺癌中TSG101蛋白与Notch3受体表达的相关性
背景与目的 TSG101蛋白是内吞分选通路的重要因子,该通路的异常会减少果蝇中Notch受体的降解,导致此受体信号对细胞分化、发育调节的紊乱.在哺乳动物中,Notch受体家族中的3亚型与肺组织发育及肺癌发生密切相关.本实验的目的是初步探讨在人类肺癌中,TSG101蛋白与Notch3受体之间的表达是否也存在关联.方法 分别采用Western blot和免疫组化sP法检测TSC101蛋白与Nowh3受体在肺癌组织、细胞系中的表达.并应用抗体封闭TSG101蛋白功能后观察Notch3受体的表达变化.结果 TSG101蛋白在肺癌中比正常肺组织表达减少,而Notch3受体在肺癌中比正常肺组织表达则增多,此变化均与肺癌的分化及淋巴结转移相关.当用抗体封闭肺癌细胞系中TSG101蛋白功能时,Notch3受体检测水平呈上升变化.结论 肺癌中TSG101蛋白表达下调,与Notch3受体检测水平七升有相关性.
