首页 > 文献资料
-
千金子甾醇诱导HL-60细胞凋亡机制研究
目的 探讨Bcl-2/Bax信号通路在千金子甾醇诱导HL-60白血病细胞发生凋亡中的作用及其分子机制研究.方法 HL-60细胞培养体系中分别加入大、中、小剂量千金子甾醇溶液,甾醇溶液作用细胞24h后,采用CCK-8法检测千金子甾醇对HL-60细胞增殖的抑制作用,光镜下观察细胞形态学变化,Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR法检测Bcl-2/Bax、Caspase-9和Caspase-3 mRNA转录水平,ELISA法检测Caspase-9和Caspase-3蛋白活性.结果 CCK-8法检测结果显示,与对照组比较,千金子甾醇能明显抑制HL-60细胞增殖(F=42.97,P＜0.001),各个浓度之间进行比较,差异有统计学意义,P＜0.05.流式细胞术检测细胞凋亡率显著增加(F=56.74,P＜0.001),经10、20和40 μg/mL千金子甾醇处理24 h后,HL-60细胞早期凋亡率分别为(23.4±3.1)％、(35.7±4.3)％和(53.2±3.9)％,细胞呈典型凋亡形态学改变.千金子甾醇作用后,Bax mRNA转录水平显著升高,Bcl2 mRNA转录水平显著降低,且呈化合物剂量依赖性(F=53.45,P＜0.001),Caspase-9和Caspase-3 mRNA转录水平升高,且呈化合物剂量依赖性(F=34.21,P＜0.001),千金子甾醇对HL-60细胞作用24 h后Caspase-9和Caspase-3蛋白活性显著升高(F=54.33,P＜0.001),且随着千金子甾醇浓度增加蛋白活性逐渐升高.结论 千金子甾醇通过调节Bcl-2/Bax凋亡信号通路,诱导HL-60细胞凋亡,其作用呈明显剂量依赖性.
-
在体单向肠灌流模型研究千金子甾醇在大鼠肠吸收特性
目的：研究千金子甾醇在大鼠肠道内的吸收情况以及P-糖蛋白（ P-gp）和多药耐药相关蛋白（ MRP2）对千金子甾醇肠吸收的影响。方法采用大鼠在体单向肠灌流模型，运用高效液相色谱法测定十二指肠、空肠、回肠、结肠灌流液中千金子甾醇的含量，计算吸收速率常数（ Ka ）和表观渗透系数（Papp）。结果千金子甾醇在大鼠结肠的Ka 及Papp高（P＜0．05）。加入P-gp抑制剂盐酸维拉帕米后，千金子甾醇在结肠段的Ka 及Papp显著增加；而加入MRP2抑制剂吲哚美辛后，千金子甾醇在大鼠结肠段的Ka及Papp普遍降低。结论千金子甾醇在肠道中的主要吸收部位为结肠，推测千金子甾醇可能为P-gp的底物，而非MRP2的底物。
-
千金子甾醇在Caco-2细胞单层模型中的吸收研究
目的 研究千金子甾醇在Caco-2细胞单层模型中的吸收和转运.方法 用Caco-2细胞模型研究千金子甾醇在Caco-2细胞模型中的双向转运,考察时间、药物浓度和P-糖蛋白抑制剂对千金子甾醇跨膜转运的影响.采用UPLC-MS/MS法测定药物浓度,计算表观渗透系数(Papp)以及表观渗透率(PDR).结果 在Caco-2细胞中的转运过程中,不同浓度千金子甾醇的Papp值介于1×10-6～1×10-5,其累积转运量随时间和浓度的增加而增加,具有浓度依赖性.10、30、50 μmol/L千金子甾醇的PDR分别为1.35、0.83、0.65.盐酸维拉帕米可以促进千金子甾醇由AP侧→BL侧的转运.结论 千金子甾醇在肠道中的吸收中等,以被动转运为主,可能存在肠道转运蛋白的外排机制.
-
千金子霜质量标准研究
目的 对千金子霜进行质量标准研究.方法 以泻下成分千金子甾醇及千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯为对照品,建立薄层色谱(TLC)法,并对10批不同产地的千金子霜进行鉴别.高效液相色谱(HPLC)法对千金子霜中这两种泻下成分、水分、灰分及脂肪油的含有量进行测定.结果 10批千金子霜在与千金子甾醇及千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯对应的TLC位置上,均显示出相同颜色的斑点,水分含有量为5.55％ ～ 7.22％,总灰分、酸不溶性灰分含有量分别为5.95％ ～6.82％和0.12％～0.45％,含油量为18.04％～20.00％,千金子甾醇和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯含有量分别为0.134％～0.182％和0.212％～0.248％.结论 该方法可用于千金子霜的定性鉴别及定量分析,为其质量标准的进一步完善提供了实验基础.
-
千金子种子、种仁及种皮有效成分含量比较
目的：对千金子种子、种仁及种皮中脂肪油、千金子甾醇含量进行比较，进一步确定“去壳”必要性。方法：索式提取法提取脂肪油、高效液相色谱法测定千金子甾醇含量。结果：千金子种仁占种子质量的65.87%，种皮占种子质量的34.13%；脂肪油含量一批（批号：20110707）种仁61.39%>种子45.40%>种皮4.94%，二批（批号：20100330）种仁64.47%>种子47.97%>种皮3.46%，三批（批号：20110912）种仁57.52%>种子44.04%>种皮4.59%；千金子甾醇含量一批种仁1.10%>种子0.78%>种皮0.08%，二批种仁1.30%>种子0.89%>种皮0.07%，三批种仁1.34%>种子0.85%>种皮0.09%。结论：千金子种仁中脂肪油、千金子甾醇含量远高于种皮中的含量，且种皮占种子比例较大，千金子制霜使用掺入种皮影响其外观性状和临床疗效，因此在千金子入药或制霜应用时，剥去种皮是十分必要的。
-
生千金子鉴别研究
目的:研究建立具有抗癌等特殊药理活性的毒性药材生千金子(Semen Euphorbiae)的鉴别分析方法.方法:采用形态鉴别、显微鉴别、液相色谱及液质联用技术进行研究.HPLC-UV条件:C<,18>(250 mm×2.1 mm,5 μm)；流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液,梯度洗脱:流速为200 μL·min<'-1>；进样量20μL；检测波长275 nm.LC-MS/MS条件:PE-SCIEX API-300LC-Ms-MS系统；流动相为乙腈-甲酸缓冲液,梯度洗脱；进样10μL.其他同前.结果:本文利用所建立的方法对4个不同产地的药材进行了分析.液相色谱及液质联用分析方法主要测定药材中秦皮乙素、千金子甾醇、续随子醇二乙酸二苯甲酸酯、续随子醇二乙酸苯甲酸酯、续随子醇二乙酸吡啶甲酸酯等有效成分.结论:本文研究结果可为进一步验证药材质量提供参考.
