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THY1基因影响上皮性卵巢癌SKOV3细胞株生长的体内和体外实验研究
目的 构建THY1基因真核表达载体,并转染卵巢癌细胞株SKOV3,观察重组载体在体内和体外对SKOV3生长的影响.方法 本研究于2005年3月至2007年3月通过目的 基因克隆、载体构建技术构建重组载体pcDNA3.1(+)-THY1,转染SKOV3(SKOV3-THY1组),同时设空载体转染组(SKOV3-Null组)和空白对照组(SKOV3组),甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)测定法及流式细胞术检测细胞生长及细胞周期变化;并建立雌性裸鼠异体移植卵巢癌模型,观察瘤体生长速率.结果 PCR、酶切及DNA测序证实,THY1基因正确插入真核表达载体pcDNA3.1(+),RT-PCR和蛋白质斑迹法(Western blot)证实重组载体已整合于SKOV3;SKOV3-THY1组细胞抑制率明显高于SKOV3-Null组(P<0.05);建立裸鼠致瘤模型4周后,SKOV3-THY1组瘤体体积较SKOV3-Null组和SKOV3组显著降低(P<0.05).结论 THY1真核表达载体能抑制SKOV3的恶性增殖,THY1基因可能在上皮性卵巢癌发生发展中起重要作用.
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THY1基因在卵巢上皮性癌组织中的表达
目的 检测人正常卵巢组织、卵巢浆液性囊腺瘤和浆液性囊腺癌组织中THY1蛋白的表达,探讨其表达变化与卵巢浆液性囊腺癌患者临床病理因素间的关系.方法 应用免疫组化法,检测25例人正常卵巢组织、25例卵巢浆液性囊腺瘤组织和53例浆液性囊腺癌组织中THY1蛋白的表达.结果 THY1蛋白在正常卵巢、卵巢浆液性囊腺瘤和浆液性囊腺癌组织中的阳性表达率分别为60.0%(15/25)、72.0%(18/25)和34.0%(18/53),IOD值分别为288 449.2±60 087.3、271 655.6±66 588.7和252 087.6±45 559.4.卵巢浆液性囊腺癌中,THY1蛋白的阳性表达率明显低于正常卵巢和卵巢浆液性囊腺瘤组织(P<0.05),且THY1蛋白的表达量与卵巢浆液性囊腺癌的手术-病理分期、组织学分级及淋巴结转移呈显著负相关(均P<0.05).结论 THY1基因的缺失可能与卵巢浆液性囊腺癌的发生、发展相关.
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鼻咽癌侵袭与转移相关基因的研究进展
0 引言鼻咽癌是头颈部常见恶性肿瘤之一,其局部复发及远处转移一直是影响鼻咽癌患者长期存活的主要因素.而肿瘤的侵袭与转移是受多种因素调控的复杂过程,涉及肿瘤细胞增殖、肿瘤新血管形成、肿瘤细胞黏附、细胞凋亡以及肿瘤细胞迁移运动等一系列行为.本文就近年来研究比较热点的基因HPA, HIF-1, NGX6, LTF, THY1与鼻咽癌侵袭与转移的关系作一综述.
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THY1基因对上皮性卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用
目的 构建THY1真核表达质粒,并探讨THY1基因对上皮性卵巢癌细胞系SKOV3生长的影响.方法 通过RT-PCR方法,从人正常卵巢组织中获得THY1基因,将其插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建成重组质粒pcDNA3.1(+)-THY1,并转入大肠杆菌JM109,筛选出含有正确插入片段的克隆,经PCR、酶切及DNA测序鉴定;脂质体介导法转染SKOV3细胞并筛选稳定表达(SKOV3-THY1组),同时设空质粒转染组(SKOV3-Null组)和空白对照组(SKOV3组),RT-PCR和Western blotting鉴定重组质粒的表达情况;MTT法和流式细胞术检测THy1对SKOV3细胞生长和凋亡等生物学行为的影响.结果 经过PCR、酶切及DNA测序证实,外源性THY1基因正确插入到真核表达质粒pcD-NA3.1(+)中,RT-PCR和western blotting证实此重组质粒已整合于SKOV3细胞并获稳定表达;MTT法结果提示SKOV3-THYl组的细胞抑制率(第5天的细胞抑制率为56.6%)明显高于SKOV3-Null组(12.5%)(P＜0.05);流式细胞术检测结果显示,SKOV3-THY1组凋亡率(31.8%)明显高于SKOV3-Null组(10.5%)和SKOv3组(9.8%),差异有统计学意义(P＜0.05),SKOV3-Null组和SKOV3组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功构建了THY1真核表达质粒pcDNA3.1(+)-THY1,该质粒转染SKOv3细胞可抑制其生长,THY1基因可能在上皮性卵巢癌发生、发展的过程中起重要作用.
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THY1基因真核表达质粒的构建及其对卵巢癌细胞SKOV3生长的影响
构建THY1真核表达质粒并转染卵巢癌细胞SKOV3,探讨其对SKOV3细胞生长的影响.通过目的基因克隆,构建pcDNA3.1(+)-THY1质粒并转染SKOV3细胞,实验分3组:重组质粒转染组(SKOV3-THY1)、空质粒转染组(SKOV3-Null)和未转染组(SKOV3).RT-PCR和免疫细胞化学方法鉴定THY1表达情况;MTT和流式细胞术检测THY1对SKOV3细胞增殖及周期的影响.DNA测序证实THY1正确插入pcDNA3.1(+)中,并整合于SKOV3细胞;SKOV3-THY1组的细胞抑制率明显高于SKOV3-Null组;且其G1期细胞比例明显高于另两组.结论:S期细胞比例明显低于另两组.结论:成功构建THY1真核表达质粒,该质粒可抑制SKOV3细胞生长.
关键词： 基因 THY1 真核表达质粒 卵巢癌细胞SKOV3
