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慢病毒介导hIL-24基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移及侵袭性的影响
目的 研究人白细胞介素-24(human interleukin-24,hlL-24)基因对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KF)增殖、迁移、侵袭性的影响.方法 将携带hIL-24及绿色荧光蛋白的慢病毒载体(LV-hlL-24-GFP,KF-hIL-24组)及空载体(LV-GFP,KF-NC组)感染KF细胞,并设空白对照组(KF组),应用实时定量PCR和Western blot分别检测hlL-24 mRNA及蛋白的表达;MTT法检测KF细胞增殖情况;流式细胞仪法测定KF细胞周期;划痕实验和Trans-well小室实验检测KF细胞的体外迁移和侵袭能力.结果 hIL-24慢病毒载体感染KF细胞96 h后,KF-hIL-24组hIL-24 mRNA和蛋白的表达量明显高于KF-NC组和KF组,差异有统计学意义(P ＜0.01);MTT结果显示,KF-hIL-24组吸光度A值明显降低,与KF-NC组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞周期结果显示, hIL-24基因阻滞KF细胞在G1期[(75.40±2.10)％]、S期[(4.96±1.60)％]和G2期[(0.01 ±0.01)％]细胞比例下降,与KF-NC组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);划痕实验和Trans-well实验结果显示,hIL-24慢病毒载体能够抑制KF细胞的体外迁移和侵袭能力.结论 hlL-24慢病毒载体能够抑制KF细胞增殖、细胞周期进程、迁移及侵袭能力.
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腺病毒载体介导IL-24基因对肺癌细胞的化疗增敏效应
目的 研究携带人IL-2基因腺病毒载体(Ad-IL-24)联用顺铂(DDP)对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞生长和凋亡的影响.方法 取对数生长期的NCI-H460细胞,MTT比色法检测Ad-IL-24联合DDP对细胞生长的影响,流式细胞仪分析细胞周期及检测细胞凋亡率.结果 Ad-IL-24联合DDP对NCI-H460细胞的生长抑制作用和诱导凋亡效应均明显优于单用Ad-IL-24和单用化疗药物DDP,且G2/M期细胞比例显著增加(P＜0.05或＜0.01).结论 Ad-IL-24能提高NCI-H460肺癌细胞对化疗药物DDP的敏感性.
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人白细胞介素-24基因的克隆及序列测定
目的克隆人白细胞介素-24 (hIL-24) 基因,以供重组表达.方法利用自行设计合成的一对引物,采用RT-PCR技术从LPS活化的人外周血单个核细胞的总RNA中分离hIL-24 cDNA并重组到pUC19载体上,进行酶切鉴定和DNA序列测定.结果 PCR及酶切产物电泳结果均证明所克隆的基因为621 bp.经序列测定证实所克隆的hIL-24与GenBank报道的结果完全一致.结论该基因系国内首次获得并经序列测定证实的hIL-24 cDNA基因.这为进一步在真核或大肠杆菌中高效表达有活性的重组hIL-24,更深入地研究其作用机制以及临床应用奠定了坚实的基础.
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人IL-24重组蛋白免疫刺激及血管形成抑制作用
目的 探讨人重组白细胞介素-24(rhIL-24)蛋白体外免疫刺激功能和血管形成抑制作用.方法 将原核稳定表达得到的rhIL-24蛋白刺激外周血单个核细胞(PBMC),ELISA检测其刺激免疫细胞分泌白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及γ-干扰素(IFN-γ)的活性;利用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型观察rhIL-24蛋白抑制血管形成的效应.结果 rhIL-24蛋白孵育的PMBC在不同时段分泌的IL-6、TNF-α及IFN-γ浓度与阴性对照组相比存在显著差异;rhIL-24蛋白能明显抑制CAM二级和三级血管形成,与阴性组比较,差异极显著.结论 rhIL-24蛋白具有明显的免疫刺激功能和血管形成抑制作用.
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人IL-24基因在CHO细胞中的表达及其抗肿瘤效应
目的构建人IL-24基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并检测重组表达蛋白rhIL-24的抗肿瘤活性.方法将测序验证的人IL-24基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3,构建重组真核表达载体pcDNA3-hIL-24,转染CHO细胞进行稳定表达,经RT-PCR鉴定后用MTT法、Hoechst染色和流式细胞术检测CHO细胞表达的rhIL-24诱导A549人肺腺癌细胞凋亡的抗肿瘤效应,用ELISA检测其刺激免疫细胞分泌IL-6和IFN-γ的功能.结果经双酶切和PCR鉴定,重组真核表达载体构建正确,人IL-24在CHO细胞中获得稳定表达,且所表达的人IL-24具有较强的诱导A549人肺腺癌细胞凋亡及上调免疫细胞表达IL-6和IFN-γ的免疫刺激活性.结论人IL-24基因的稳定表达和抗肿瘤效应的实验研究,为进一步研究人IL-24抗肿瘤的分子机制及潜在的应用奠定了基础.
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IL-24 cDNA转染人喉癌细胞系的建立及其表达的研究
目的 建立转染人白细胞介素-24(hIL-24)基因的喉癌细胞株,并研究hIL-24的表达情况.方法 将携带人白细胞介素-24的质粒peDNA3.1(+)-hIL-24转导入人喉表皮样癌细胞Hep-2中,G418筛选阳性克隆,RT-PCR、Western blot和ELISA法对hIL-24的表达进行检测.结果 IL-24基因成功地转导入Hep-2细胞中并能高效表达.RT-PCR电泳结果显示hIL-24基因在mRNA水平有表达;ELISA法测得106个转染阳性细胞24h内培养上清液中hIL-24的含量为162.8±15.4 pg/mL,空载体转染及未转染的细胞未检测到hIL-24.结论 hIL-24基因成功转染人喉癌细胞系Hep-2细胞且能持续大量表达.
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过表达MDA-7/IL-24蛋白的亚细胞定位
目的了解标签蛋白GFP的位置对过表达的MDA-7/IL-24融合蛋白亚细胞定位的影响.方法分别构建在MDA-7/IL-24 cDNA的5' 端和3' 端带有GFP- tag的重组表达质粒pEGFP-C1-mda-7/IL-24和pEGFP-N3- mda-7/IL-24,瞬时转染猴胚肾Cos7细胞,48h后用Hoechst 33258染核,在荧光显微镜下观察GFP- MDA-7/IL-24融合蛋白在Cos7细胞的亚细胞分布.结果测序表明重组质粒pEGFP-C1-mda-7/IL-24和pEGFP-N3-mda-7/IL-24构建正确;分别转染Cos7细胞后,在氨基端带有GFP-tag的MDA-7/IL-24融合蛋白表达阳性细胞中,绿色荧光均匀分布于胞浆和胞核,但在羧基端带有GFP-tag的MDA-7/IL-24融合蛋白表达阳性细胞中,绿色荧光则分布于核膜外侧和胞浆.结论 GFP-tag位置的不同对过表达融合蛋白MDA-7/IL-24的亚细胞定位有显著的影响.
关键词： 黑素瘤分化相关基因-7 人白细胞介素-24 绿色荧光蛋白
