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AnnexinⅤ法检测HepG2细胞凋亡
目的 应用Annexin V-PITC/PI技术检测化疗药物顺铂(CDDP)诱导肝癌细胞(HepG2)凋亡作用的特性.方法 将不同浓度的CDDP与肝癌细胞株HepG2共孵育4 h、15 h、24 h、36 h后,应用流式细胞术和Annexin V-PITC/PI双染免疫荧光法观察细胞凋亡情况.结果 CDDP可以诱导HepG2细胞发生凋亡,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,发生凋亡和坏死细胞的比例增加.结论 化疗药物CDDP诱导肝肿瘤细胞凋亡呈时间和剂量依赖性.AnnexinⅤ-FITC /PI双标记流式细胞术可用于早期细胞凋亡的检测.
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荷肉瘤小鼠肿瘤细胞凋亡显像实验研究
目的 制备细胞凋亡显像剂99mTc -annexinⅤ,并在荷肉瘤小鼠体内对凋亡肿瘤组织进行活体显像.方法 利用硫酸铵沉淀和Octyl-Sepharose疏水层析纯化来源于毕赤酵母重组表达、带有内在螯合位点的annexinⅤ.通过葡庚糖酸盐配体在annexinⅤ上直接标记放射性核素99mTc,Sephadex G-25脱盐处理制备99mTc -annexinⅤ.在Balb/C小鼠右侧腋下接种肉瘤株S-180,1周后荷肉瘤小鼠经腹腔注射化疗药物环磷酰胺诱导肉瘤细胞凋亡.化疗18h后经小鼠尾静脉注射99mTc -annexinⅤ,扫描6h后肿瘤组织的SPECT图像.分别于放射性药物注射后0.5、1、3、6 h处死动物,测定各脏器、组织的放射性计数,分析99mTc -annexinⅤ在荷肉瘤小鼠体内的生物分布.结果 经过硫酸铵沉淀和Octyl-Sepharose疏水层析纯化,annexinⅤ纯度达到95%.直接标记和脱盐处理制备出的99mTc -annexinⅤ放射性化学纯度为90%.将99mTc -annexinⅤ注射到环磷酰胺处理的荷肉瘤小鼠体内,肿瘤组织能够显像.结论 我们标记合成了99mTc -annexinⅤ,该探针可以活体显示肿瘤组织的凋亡情况,可能为临床应用和药物开发提供了一种手段.
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AnnexinⅤ、ET－1在子痫前期患者母血及脐血的表达及其与胎儿生长受限的关系
目的：研究子痫前期患者母血及脐血中AnnexinⅤ、ET－1的表达水平及与胎儿生长受限相关性，并探讨子痫前期发病机理及其与胎儿生长受限的关系。方法：采用ELISA方法检测子痫前期患者84例、FGR患者24例及对照组29例患者母血及脐血中AnnexinⅤ、ET－1的表达水平。结果：①子痫前期各组母血、脐血中annexinⅤ的蛋白表达水平均低于对照组，各组分别比较，差异均有高度统计学意义（P＜0．01）。在母血及脐血中均是早发组＜晚发组＜轻度组，但母血中晚发组与轻度组比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。余各组两两分别比较，差异均有高度统计学意义（P＜0．01）。各组与FGR组比较，FGR组母血及脐血中annexinⅤ的表达水平均低于轻度组、晚发重度组、对照组，分别与各组比较，差异均有统计学意义（P＜0．01）。但FGR组与早发重度组比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。②各组孕妇母血及脐血中ET－1水平变化，子痫前期各组均明显高于对照组，分别比较，差异均有高度统计学意义（P＜0．01）。在母血中早发重度型＞晚发重度型＞轻度子痫前期患者，差异仍有统计学意义（P＜0．05）。但在脐血中轻度组与重度组比较，差异均有高度统计学意义（P＜0．01）；但早发组与晚发组比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。各组与FGR组比较，FGR组ET－1表达高于对照组及轻度组，且分别比较差异有高度统计学意义（P＜0．01）。但早发型＞FGR组＞晚发型，但分别比较，差异均无统计学意义（P＞0．05）。③AnnexinⅤ子痫前期各组及FGR组在孕妇外周血与脐血中的表达均呈明显正相关（P＜0．01）；ET－1子痫前期各组及FGR组在孕妇外周血与脐血中的表达均呈明显正相关（P＜0．01）。结论：患者母血及脐血中AnnexinⅤ、ET－1的表达可能与子痫前期发病机制有关，通过影响胎盘中凝血－纤溶系统及血管内皮系统，参与子痫前期及胎儿生长受限发生、发展的病理生理过程。
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检测急性冠脉综合征患者血小板AnnexinⅤ及CD62p的临床意义
目的: 观察急性冠脉综合征患者血小板膜连蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)及P选择素(CD62p)的变化及其临床意义. 方法: 流式细胞术(FCM)检测78例冠心病患者及26例健康体检者血小板膜AnnexinⅤ和CD62p的阳性百分率.结果: 冠心病组AnnexinⅤ表达率与对照组相比,显著性升高(P＜0.01),不稳定型心绞痛组及心梗组与对照组相比,CD62p表达率显著性升高(P＜0.01).心梗组和不稳定型心绞痛组与稳定型心绞痛组比较,AnnexinⅤ及CD62p表达率均有显著性差异(P＜0.01).结论: 测定血小板AnnexinⅤ和CD62p对急性冠脉综合征患者的诊断有重要意义.
