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以海藻酸三维支架构建骨髓间充质干细胞源性生物人工肝组织的实验研究
目的 以骨髓间质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSC)为种子细胞,以海藻酸三维支架为载体,研究两者的相容性及其构建生物人工肝组织的可能性.方法 将大鼠BMSC接种于海藻酸三维支架上,采用倒置相差显微镜、扫描电镜分别检测BMSC的黏附、生长与增殖情况,评价两者的相容性;同时以表皮生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)、成纤维生长因子4(FGF-4)等细胞因子混合液诱导BMSC向肝细胞分化,检测培养液内尿素氮和白蛋白含量,RT-PCR检测培养细胞ALB和AFP基因的表达,糖原染色及免疫荧光法检测细胞糖原合成功能和CK-18的表达. 结果大鼠BMSC在海藻酸三维支架上能正常地黏附、生长和增殖;于海藻酸三维支架内加入诱导液作用于BMSC后,培养液内尿素和ALB的含量逐渐上升,RT-PCR检测到培养细胞有AFP和ALB基因的表达,同时被诱导的细胞具有糖原储存的功能并表达CK-18.结论 海藻酸三维支架与大鼠BMSC具有良好的相容性;以EGF、HGF、FGF-4等细胞因子混合液为诱导因子,能在海藻酸三维支架上成功诱导BMSC向肝细胞分化;海藻酸三维支架和BMSC可望成为肝脏组织工程理想的种子细胞和细胞载体.
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利用血管内皮细胞实现海藻酸人工肝脏支架血管化的研究
目的 探讨利用血管内皮细胞(VEC)实现海藻酸人工肝组织支架(AS)血管化的可能.方法 构建VEC-AS复合物,通过显微镜及噻唑蓝(MTT)法检测两者相容性.采用70％肝切除模型,实验组(A组)给予VEC-AS复合物,对照组(B组)给予AS.术后第14、28天处死大鼠,大体及切片检查观察两组大鼠移植物表面及内部血管形成.结果 显微镜下观察VEC能够在AS上良好的黏附、增殖;MTT法检测VEC在AS上1～3 d进入生长潜伏期,第4～7天进入快速增长期,第16～19天开始进入平台期.14 d后移植物表面观察到新生血管,切片检查发现新生血管从周围肝组织向移植物长入,血管内见红细胞;28 d移植物周围血管增粗增多,切片检查发现移植物内血管明显增粗,血管内红细胞增多,中心亦可见大量新生血管.而B组内从术后第7 ～ 28天均未见任何血管长人.结论 VEC和AS具有良好生物相容性,利用VEC可以在体内初步实现AS血管化.
