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泛耐药鲍曼不动杆菌PBP1A、CarO及β-内酰胺酶的编码基因分析
目的 了解一株泛耐药鲍曼不动杆菌(js01株)可能存在的β-内酰胺类药物耐药机制.方法 对自2011年12月宁波市第一医院住院患者的痰样本js01株分离,用gyrA和parC基因PCR扩增、测序和BLASTn比对确认菌种.用PCR法分析33种β-内酰胺酶基因(13种A类酶基因、10种B类酶基因、2种C类酶基因、8种D类酶基因)和插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测以及CarO膜孔蛋白编码基因.再用分段PCR法扩增PBP1A编码基因,双向测序后拼接成全长序列.结果 js01株检出β-内酰胺酶TEM-1、ADC-30、OXA-23和OXA-66编码基因.插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测显示ISabaI-ADC-30和ISabal-OXA-23为阳性.js01株carO基因序列与鲍曼不动杆菌敏感株(SDF)相比存在有义突变,氨基酸序列一致率为76.0％ (189/249),存在3个氨基酸缺失.js01株PBPIA编码基因序列与SDF株相比存在有义突变,氨基酸序列的一致率为99.6％( 848/851),存在3个氨基酸变异,但js01株PBPIA蛋白分子立体结构比SDF株丢失2个螺旋结构.结论 本株鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药主要与该菌株管家基因(PBP1A、CarO编码基因)突变与可移动遗传元件介异的β-内酰胺酶编码基因有关.
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亚胺培南耐药的鲍氏不动杆菌OXA、AdeABC、CarO基因及生物膜的研究
目的：通过对临床分离的亚胺培南耐药和敏感鲍氏不动杆菌 OXA、AdeABC、CarO基因及生物膜形成分布进行调查，进一步分析鲍氏不动杆菌对亚胺培南的耐药机制。方法对2014年11月－2015年10月医院临床分离106株亚胺培南耐药和102株亚胺培南敏感的鲍氏不动杆菌运用PCR技术分别进行 OXA、AdeABC、CarO基因的检测；采用96孔微量滴定板法体外构建生物膜并对其进行定量。结果在所有检测菌株中亚胺培南耐药和敏感菌株OXA‐23检出率分别为99．1％和2．9％，差异有统计学意义（P＜0．05）；OXA‐24基因仅在1株耐药菌株中检出；OX A‐51基因均为阳性，而OX A‐58基因均为阴性；而 A deA BC基因在耐药和敏感菌株分布具有较大差异。结论 OX A‐23基因是流行的基因，是医院耐亚胺培南鲍氏不动杆菌的主要OXA 亚型；临床鲍氏不动杆菌所引发的感染多数与生物膜的形成有关，对医院临床治疗提供了有效的科学依据。
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烧伤患者感染耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶与膜孔蛋白编码基因研究
目的：了解烧伤患者分离耐药鲍氏不动杆菌β‐内酰胺酶和膜孔蛋白 CarO、op rD2基因的存在状况，以探讨鲍氏不动杆菌耐药的分子水平依据。方法20株耐药鲍氏不动杆菌均分离自2012年10月－2013年8月医院住院烧伤患者，采用GNS‐448药敏卡及K‐B法测定抗菌药物的敏感性，聚合酶链反应（PCR）检测34种β‐内酰胺酶和膜孔蛋白 CarO ，op rD2基因，数据采用SPSS 15．0软件进行统计分析。结果20株鲍氏不动杆菌对12种常用抗菌药物严重耐药，对头孢唑林、头孢噻肟和头孢西丁的耐药率达100．0％；20株耐药鲍氏不动杆菌β‐内酰胺酶编码基因检出率，blaT EM‐1为10．0％、blaA DC为100．0％、blaOX A‐2群为95．0％、blaOX A‐24群为5．0％、blaOX A‐23群为95．0％、blaOX A‐66群为95．0％；耐药株与SDF株的OprD2蛋白分子立体结构存在4个氨基酸的变异。结论医院分离的20株耐药鲍氏不动杆菌存在β‐内胺酶基因 blaA DC变异型、blaOX A‐23和 blaOX A‐66，与SDF株的OprD2蛋白分子立体结构存在明显差异。
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从耐药鲍曼不动杆菌中发现β-内酰胺酶ADC基因和膜孔蛋白carO基因新的变异型
目的 调查一组耐药鲍曼不动杆菌中β-内酰胺酶基因和膜孔蛋白基因的存在和变异情况.方法 收集2010年1月至2010年12月浙江某医院ICU患者痰液标本中分离的多耐药和泛耐药鲍曼不动杆菌各10株,用分子鉴定法鉴定菌种,再用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析34种β-内酰胺酶基因与膜孔蛋白carO基因.结果 本组20株耐药鲍曼不动杆菌共检出TEM-1型20株(100％)、OXA-23型10株(50.0％)、ADC-30型12株(60.0％)、ADC基因新的变异型ADC-60型8株(40.0％)(GenBank登录号:JQ692087).10株PDR菌均检出OXA-23型β-内酰胺酶基因,而10株MDR菌则均未检出OXA-23型β-内酰胺酶基因.20株耐药鲍曼不动杆菌膜孔蛋白carO基因均存在有义突变,19株测得序列相同,翻译成氨基酸序列后与鲍曼不动杆菌敏感株(SDF)比较,一致率为76.0％.8号株carO基因序列与其他19株测得DNA序列不同,第351位缺失了12个碱基并导致过早出现终止密码子.结论 本组鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药主要与产TEM、ADC、OXA-23和carO基因存在有义突变相关.OXA-23型β-内酰胺酶基因阳性是PDR菌耐碳青霉烯类药物的原因.ADC基因存在新变异型:ADC-60是国内外首次报道.
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OXA、 AdeABC、 CarO基因及生物膜在鲍曼不动杆菌中的分布研究
目的 通过对OXA、AdeABC、CarO基因及生物膜在临床分离的亚胺培南耐药和敏感鲍曼不动杆菌(AcinetobacterBaumannii,AB)中分布特征的研究,进一步探讨AB对亚胺培南的耐药机制.方法 运用PCR技术对OXA、AdeABC、CarO基因进行检测;采用微量滴定板法制备生物膜模型及定量实验.结果 OXA-23在亚胺培南耐药和敏感菌株中的检出率分别为99.1％和2.9％(P＜0.05);OXA-51基因在所有检测菌株中均被检出.AdeABC在耐药菌株中的检出率为98.1％,而在敏感菌株中的检出率仅为64.7％(P＜0.05).CarO基因在耐药和敏感菌株中的检出率分别为97.2％和99.0％,P＞0.05.产生物膜菌株在耐药和敏感菌株分别为67.9％和75.5％,P＞0.05.结论 OXA-51基因是确认是否为AB的标志性基因;OXA-23基因在AB对碳青霉烯类抗生素耐药机制中起到了重要的作用;AdeABC外排泵在降低AB对亚胺培南的敏感性,增强细菌耐药性方面起着重要作用;外膜蛋白CarO的改变对于降低AB对亚胺培南的敏感性的可能性不大;临床分离的AB所引发的感染多数与生物膜的形成有关.
