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运动调控骨代谢的关键膜上受体—G蛋白偶联受体48
G蛋白偶联受体48(GPR48)作为一富含亮氨酸重复序列的膜上七次跨膜受体,其LRR结构域与R-spondin1或Norrin结合形成复合体后可作用于下游关键因子可调控骨质疏松、阿尔茨海默病、高血压等疾病发生.骨作为重要的生理学和生物力学组织,由成骨细胞(OB)和破骨细胞(OC)分别主导的骨形成和骨吸收之间的拮抗及协同调控骨组织代谢平衡.骨细胞是力学刺激敏感细胞,调节应力加载后的骨适应性反应,而运动训练对骨产生的力学刺激可翻译成结构级联性生化反应(Wnt、cAMP/PKA/Atf4、OPG/RANKL/RANK等途径稳态表达),调控骨形成和/或骨吸收.并且,GPR48通过R-spondin1可直接调控以上信号途径的激活状态.那么,GPR48能否通过下游级联信号途径从而在运动影响骨代谢中起分子介导作用呢？探究GPR48在运动影响骨代谢中的作用及其分子介导机制,希望能进一步完善运动影响骨代谢的分子机制信号网络并为骨疾病诊治提供新靶点和非药物干预方式.
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膀胱癌组织GPR48表达及其临床意义
目的 G蛋白偶联受体48(G protein coupled receptor 48,GPR48)在人类细胞信号传导过程中起重要作用,并且与人类肿瘤的发生相关.本研究旨在探讨膀胱癌组织GPR48的表达水平,分析其与膀胱癌恶性程度的相关性.方法 选取2014 01-01 2016 05 20郑州大学附属郑州中心医院泌尿外科住院行手术切除治疗的膀胱癌组织标本60例和癌旁组织(距肿瘤组织＞2 cm)标本8例,BIU-87、5637和T24 3种膀胱癌细胞系作为研究对象,通过RT-PCR和蛋白质印迹法检测GPR48的表达量,收集60例患者性别、年龄、病理分级等临床病理资料,并检测其与GPR48表达的相关性.结果 GPR48在膀胱癌旁组织及癌旁组织中均有表达,膀胱癌组织和癌旁组织GPR48 mRNA表达量分别为0.080±0.048和0.041±0.032,差异有统计学意义,t=-3.047,P=0.005.膀胱癌组织和癌旁组织GPR48蛋白表达量分别为0.533±0.307和0.144±0.086,差异有统计学意义,t=-3.541,P=0.001.分析患者临床病理资料发现,GPR48的表达与患者性别无关,P＞0.05;而与患者年龄、病理分级和临床分期呈正相关,均P＜0.01.BIU-87、5637和T24细胞系中GPR48 mRNA的表达量分别为0.021±0.002、0.054±0.006和0.145±0.003,GPR48蛋白的表达量分别为0.718±0.076、0.905±0.121和1.205±0.08.T24细胞系GPR48 mRNA及蛋白表达量显著高于5637细胞系,均P＜0.05;5637细胞系GPR48 mRNA及蛋白表达量显著高于BIU-87细胞系,均P＜0.05.结论 GPR48表达与膀胱癌的恶性程度密切相关,有望成为一种潜在的生物标志物来预测膀胱癌的预后.
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GPR48单克隆抗体的制备及其在甲状腺癌中的表达
目的 制作G蛋白偶联受体48(GPR48)的单克隆抗体并研究其在甲状腺癌中的表达.方法 利用细胞融合法制作单克隆抗体,蛋白免疫电泳法检测单克隆抗体.免疫组化法研究GPR48蛋白在90例甲状腺癌及35例良性甲状腺组织中的表达情况.结果 成功制备了GPR48的特异性单克隆抗体.良性甲状腺疾病组织和癌对侧的甲状腺组织中几乎没有GPR48的表达.甲状腺癌组织中GPR48表达阳性率为61.1%(55/90).未分化型甲状腺癌和分化型甲状腺癌中GPR48的表达阳性率分别为80.0%和55.7%(P=0.09),伴有淋巴结转移和不伴有转移的分化型甲状腺癌中GPR48的表达阳性率分别为77.3%和45.8%(P=0.03).结论 GPR48抗体可用于相应蛋白的特异性检测,GPR48可作为提示肿瘤分化和淋巴结转移的新标记物.
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大鼠创伤性股骨头坏死进程中ATF4与GPR48的表达联控
目的 探讨大鼠创伤性股骨头坏死进程中活性转录因子4(ATF4)与G蛋白偶联受体48(GPR48)的表达方式及其相关性,研究两者在坏死进程中的联控效应.方法 6月龄SD大鼠36只,随机分为实验组(n=24)和对照组(n=12).实验组采用圆韧带离断结合骨膜翻转术,对照组采用假手术作为对照.术后1、2、4周收集双侧股骨头,采用组织学、免疫组织化学、RT-PCR、Western blotting等方法检测股骨头坏死变化、ATF4动态表达变化及其与GPR48表达的相关性.结果 ①组织学观察显示,股骨头坏死为渐进性发展,实验组1、2周股骨头关节软骨表面略显粗糙,4周时关节软骨出现不同程度的虫蚀样破损;②免疫组化显示,实验组ATF4、GPR48和PCNA表达量在3个不同时间点逐渐增加,但均低于对照组(P＜0.05);③RT-PCR结果显示,ATF4和GPR48在3个不同时间点逐渐增加(P＜0.05).④Western blotting分析显示,实验组ATF4和GPR48在3个不同时间点逐渐增加,但均低于对照组(P＜0.05).⑤Pearson相关性分析显示,ATF4与GPR48在不同时间点呈正相关(r=0.659,P＜0.01).结论 创伤性股骨头坏死发展进程中,初期ATF4和GPR48表达下降,但随坏死进程而逐渐增加,两者表达呈正相关,可能与坏死所伴随的局部修复有关.
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膀胱癌组织GPR48基因的表达及其临床意义
目的 探讨G蛋白偶联受体48(GPR48)基因在膀胱癌组织中的表达及意义.方法 取83例膀胱癌患者手术切除的癌组织标本和癌旁正常组织标本(均经病理检查证实),采用实时荧光定量PCR法检测GPR48 mR-NA相对表达量,采用免疫组化法检测GPR48蛋白.分析GPR48 mRNA表达与患者临床病理参数的关系.采用Kaplan-Meier生存曲线法和Log-Rank检验比较GPR48高表达(癌组织GPR48蛋白染色强度大于对应的癌旁正常组织)和低表达(癌组织 GPR48蛋白染色强度小于对应的癌旁正常组织),者术后5年总生存率及生存时间.结果 癌组织、癌旁组织GPR48 mRNA相对表达量分别为4.68 ±2.24、1.12 ±0.31,P<0.05.GPR48 mRNA相对表达量与膀胱癌患者的年龄、淋巴结转移、远处转移和临床分期有关(P均<0.05),与患者性别、肿瘤直径和分化程度无关(P均>0.05).GPR48高表达者(71例)癌组织GPR48蛋白染色强度大于对应的癌旁组织,GPR48低表达者(12例)癌组织GPR48蛋白染色强度小于对应的癌组织;GPR48低、高表达者术后5年总生存率分别为91.67%、57.75%,生存时间分别为(56.00 ±3.83)、(47.97 ±2.07)个月,P均<0.05.结论 GPR48在膀胱癌组织中呈高表达.膀胱癌组织GPR48 mRNA表达情况有助于判断患者病情及预后预后.
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GPR48与TLR4在大鼠激素性股骨头坏死组织中的表达及其相关性分析
目的 探讨G蛋白偶联受体48(G protein coupled receptor 48,GPR48)和Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)在大鼠激素性股骨头坏死组织中的表达变化及其相关性,阐明GPR48与TLR4在激素性股骨头坏死进程中的调控作用.方法 健康SD大鼠68只,按随机数字表法分为实验组(44只,肌注地塞米松10 mg/kg,每周1次)和对照组(24只,注射等体积生理盐水代替激素),于2、6、8、10周时分别获取实验组11只和对照组6只大鼠的双侧股骨头,进行组织学观察(HE、Masson三色染色)、免疫组化及RT-PCR检测.结果 ①HE染色显示,实验组2周可见骨小梁微小断裂,10周骨小梁断裂范围扩大,形成大量空骨陷窝;Masson三色染色及胶原含量分析显示,与对照组相比,实验组单位面积内胶原含量从第6周开始下降,第10周明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05),实验组组内各个时间点的比较差异有统计学意义(P＜0.05),胶原含量呈逐渐下降趋势;②免疫组织化学染色分析:实验组6、8、10周各个时间点GPR48表达的累积光密度(5.87 ±0.53)、(4.82±0.52)、(3.94±0.49)均低于对照组(P＜0.05),并呈逐渐降低趋势;实验组6、8、10周各个时间点TLR4表达的累积光密度(6.93±0.58)、(8.10±0.46)、(8.70±0.95)均高于对照组(P＜0.05),并呈逐渐上升趋势;实验组不同时间点GPR48与TLR4表达呈负相关(r=-0.821,P＜0.05);③RT-PCR检测:GPR48 mRNA表达在实验组内各个时间点之间呈逐渐降低趋势,而TLR4 mRNA表达则呈逐渐上升趋势;实验组不同时间点GPR48与TLR4 mR-NA表达呈负相关(r=-0.791,P＜0.05).结论 大鼠激素性股骨头坏死发展进程中GPR48和TLR4的表达呈负相关性,共同介导坏死过程中的炎症免疫反应.
