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共培养体系中重组结核杆菌热休克蛋白10对破骨细胞相关基因表达的影响（R68）
目的：观察重组结核杆菌热休克蛋白10（CPN10）对成骨细胞（OB）－外周血单个核细胞（PBMs）共培养体系中破骨细胞生成及相关基因表达的影响。方法建立培养上清相通但二者互相不接触的成骨细胞一单个核细胞共育模型。实验分对照组和CPN10（10μg／ml）处理组。主要观察指标：①采用TRAP染色及扫描电镜检测破骨细胞生成及小牛骨磨片吸收陷窝，②应用Realtime PCR检测与破骨细胞生成相关基因NFATc1、c－Fos、RANKL、OPG的基因表达。结果两组细胞均有TRAP阳性多核破骨细胞生成，并在小牛骨磨片上形成吸收陷窝；但对照组所获TRAP阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及面积均显著小于CPN10组。 Realtime PCR检测结果显示CPN10组与对照组相比NFATc1、c－Fos、RANKL、OPG相对浓度分别为7．410±1．738、8．844±1．981、22．4272±2．058、2．445±0．2517（P＜0．05），对照组各基因表达均显著低于CPN10组。结论 CPN10在成骨细胞－单个核细胞（ OB－PBMs）共培养体系中可促进OC的生成及骨吸收，CPN10通过对成骨细胞的作用，致其分泌的OPG／RANKL比例失调，并上调破骨细胞相关基因NFATc1、c－Fos、RANKL、OPG的基因表达。
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共培养体系中重组结核杆菌热休克蛋白10对破骨细胞相关基因表达的影响
目的观察重组结核杆菌热休克蛋白10（CPN10）对成骨细胞（OB）-外周血单个核细胞（PBMs）共培养体系中破骨细胞生成及相关基因表达的影响。方法建立培养上清相通但二者互相不接触的成骨细胞一单个核细胞共育模型。实验分对照组和CPN10（10μg/ml）处理组。主要观察指标：①采用TRAP染色及扫描电镜检测破骨细胞生成及小牛骨磨片吸收陷窝，②应用Realtime PCR检测与破骨细胞生成相关基因NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG的基因表达。结果两组细胞均有TRAP阳性多核破骨细胞生成，并在小牛骨磨片上形成吸收陷窝；但对照组所获TRAP阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及面积均显著小于CPN10组。Realtime PCR检测结果显示CPN10组与对照组相比NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG 相对浓度分别为33.4798±2.0929、47.974±5.1628、47.0861±2.2033、7.4642±0.6791（P<0.05），对照组各基因表达均显著低于CPN10组。结论 CPN10在成骨细胞-单个核细胞（OB-PBMs）共培养体系中可促进OC的生成及骨吸收，CPN10通过对成骨细胞的作用，致其分泌的OPG/RANKL比例失调，并上调破骨细胞相关基因NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG的基因表达。
关键词： 重组结核杆菌热休克蛋白10 破骨细胞 共培养 成骨细胞 -
人破骨细胞分化中重组结核杆菌热休克蛋白10的影响
背景：体外小鼠颅盖骨实验已证实了其结核杆菌热休克蛋白10的破骨效应。
目的：在诱导破骨细胞分化的体外细胞培养系统中，研究重组结核杆菌热休克蛋白10对破骨细胞分化的影响及相关机制。
方法：选用人巨噬细胞集落刺激因子依赖性附着性血液单个核细胞，实验分为：核因子κB受体活化因子配体+重组结核杆菌热休克蛋白10组、核因子κB受体活化因子配体组、重组结核杆菌热休克蛋白10组(1 mg/L)、阴性对照组(完全培养基)，核因子κB受体活化因子配体+重组结核杆菌热休克蛋白10组、重组结核杆菌热休克蛋白10组中重组结核杆菌热休克蛋白10质量浓度为1 mg/L，在含有巨噬细胞集落刺激因子的a-MEM培养液重悬单核细胞，各组培养7，14，21 d后，观察所形成的抗酒石酸酸性磷酸酶阳性染色多核细胞的形态、数目、骨吸收面积；各组NFATc1、c-Fos基因及蛋白表达情况。
结果与结论：阴性对照组无抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞分化生成，其余各组均有抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞分化生成，并在小牛骨磨片上形成吸收陷窝；重组结核杆菌热休克蛋白10组形成的破骨细胞分化细胞数目、吸收陷窝数目及陷窝面积显著低于核因子κB受体活化因子配体+重组结核杆菌热休克蛋白10组；阴性对照组 NFATc1、c-Fos基因表达水平显著低于核因子κB受体活化因子配体+重组结核杆菌热休克蛋白10组和重组结核杆菌热休克蛋白10组，而重组结核杆菌热休克蛋白10组表达NFATc1、c-Fos蛋白，显著低于核因子κB受体活化因子配体+重组结核杆菌热休克蛋白10组。提示结核杆菌热休克蛋白10参与破骨细胞分化的形成，可能与诱导相关基因NFATc1、c-Fos表达上调有关。
