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T3对MG63细胞株TRAIL,OPG,OPGL表达的影响
目的 观察在不同浓度T 3环境下人成骨肉瘤MG 63细胞株肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)的表达,探讨甲亢性骨质疏松症的发病机制.方法 用不同浓度T 3(对照组,10-12、10-10、10-8 mol/L组)分别刺激培养的MG 63细胞24 h,RT-PCR法检测TRAIL,OPG,OPGL mRNA的表达.结果 T 3对MG 63细胞中TRAIL,OPGL mRNA的表达,均按照对照组、10-12 mol/L组、10-10 mol/L组、10-8 mol/L组顺序递增(P＜0.05),OPG mRNA的表达按照此顺序递减(P＜0.05),10-8 mol/L组TRAIL mRNA的水平明显高于对照组(P＜0.05).同时,OPG/OPGL比率按照对照组、10-12 mol/L组、10-10 mol/L组、10-8 mol/L组顺序递减.结论 T 3可能导致成骨细胞中TRAIL和OPGL表达增多,OPG的表达减少.这可能是甲亢性骨质疏松症的重要发病机制之一.
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胰岛素和IGF-1对成骨样细胞MG63 Ⅰ型胶原基因表达的影响
应用胰岛素(INSU)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)干预体外培养的人成骨样细胞MG 63,并以17-雌二醇(E2)做阳性对照.观察药物干预对MG 63细胞Ⅰ型胶原(COL1)表达的影响.方法用DMEM培养基培养MG 63细胞,并以INSU、IGF-1、E2进行干预.抽提各样本总RNA后,行逆转录并对COL1的cDNA进行荧光扩增和定量.结果各药物组内基因拷贝数(COPYS)均有统计学差异(P＜0.05),各组药效呈浓度依赖性增加趋势.在本实验所选的药物浓度范围内,INSU、IGF-1、E2各药物组的高药效浓度均为本实验所用的高药物浓度,分别为2×10-7mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L.3组间有统计学差异(P＜0.05),INSU和IGF-1组COPYS增长率明显大于E2组,INSU和IGF-1组比较无统计学差异.结论INSU、IGF-1和E2一样,均有显著促进MG 63分化的作用.
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甲状旁腺激素对MG63细胞OPG、OPGL及其相关因子的调节
目的 探讨甲状旁腺激素(PTH)调节骨吸收作用的途径和机理.方法 用0.2～20μgPTH干预人成骨肉瘤MG 63细胞2 d,观察PTH对MG 63细胞表达护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)及其相关因子,如肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体(TRAIL)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的影响,用RT-PCR法检测OPG、OPGL、M-CSF和TRAIL mRNA表达情况,用Western blot分析法检测OPG和OPGL蛋白表达情况.结果 PTH下调MG 63细胞中OPG的表达,上调OPGL、M-CSF及TRAIL的表达.结论 PTH能够减低成骨样细胞MG 63中OPG/OPGL表达比率,增加M-CSF、TRAIL的表达.这可能有利于促进破骨细胞生成及活化,进而促进骨吸收.
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西红花酸对骨肉瘤MG63细胞的影响及其作用机制
目的 探讨西红花酸对人成骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响及其作用机制.方法 以0、50、100、200、400 μmol/L不同浓度西红花酸处理人成骨肉瘤MG63细胞48 h后,用倒置显微镜观察MG63细胞形态的变化;用MTT法检测其对MG63存活率的影响;用划痕实验观察其对MG63细胞迁移能力的影响;用Western blot法检测其对MG63细胞中bcl-2、Caspase-3、P53、P21等凋亡相关蛋白表达水平的影响.结果 不同浓度西红花酸作用48h后,倒置显微镜观察到MG63细胞呈现凋亡的形态结构;MTT结果显示随着西红花酸浓度从0增加到400 μmol/L,MG63细胞的存活率由(100±9.5)％减少为(26.8±4)％,且与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);划痕实验可见经西红花酸处理细胞后MG63细胞的迁移能力降低;Western blot结果提示不同浓度经西红花酸(0、50、100、200 μmol/L)作用MG63细胞后,其bcl-2/β-actin的灰度比值从(56.09±4.36)％降至(18.78±1.20)％,p21/β-actin、Caspase-3/β-actin、P53/β-actin的灰度比值分别由(28.61±1.71)％、(13.90±1.65)％、(21.18±1.95)％增至(71.37±2.46)％、(112.36±2.97)％、(97.43±3.48)％,与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.01),且均呈浓度依赖性.结论 西红花酸能够促进MG63细胞凋亡并抑制其增殖,其机制可能与抑制凋亡基因bcl-2表达下调和促进凋亡的基因caspase3、p53、p21基因表达上调的调节有关.
