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异型缝隙连接通道和磷酸化对心脏缝隙连接的调变
目的检测由缝隙连接蛋白(connexin,Cx)43和Cx45组成的多种异型缝隙连接通道(heteromultimeric gap junction channels,HGJC)和磷酸化对缝隙连接(gap junction,GJ)的调变作用.方法将转染了编码为Cx43或Cx45的DNA后的Hela细胞放置在一起共同培养组成双侧和单侧异型GJ通道.显微注射若丹明123(rhodamine 123,Rh)检测经200 nmol/L十四(烷)酰佛波醇乙酸酯(12-0-tetradecanoylphorbol-13-acetae,TPA)处理前后,在紫外光显示下由Cx43和Cx45所组成的不同GJ通道对荧光染料的偶联率(coupling ratio).结果在不同的GJ中,同型GJ通道Cx43(homotypic Cx43,HoCx43)偶联率高.从Cx45侧注入荧光染料的单侧异型GJ通道45(mono-heteromeric Cx45-Cx43/45,MH45)偶联率较之从Cx43/45侧注入荧光染料的MH45、双侧异型GJ通道Cx43/45(bi-heteromeric Cx43/45,BH43/45)及同型GJ通道Cx45(homotypic Cx45,HoCx45)等的偶联率是低的.根据HoCx43或HoCx45通道的偶联率对各型通道偶联率进行标准化处理.BH43/45和MH43通道的偶联率均较HoCx43降低.对MH45通道来说,从Cx43/45侧注射的通道偶联率大于从Cx45侧注射的偶联率.TPA处理后HoCx43的偶联率降低,而当Cx43和Cx45组合成BH43/45和MH43通道后其偶联率下降更显著.结论 Cx43和Cx45共同表达可构成BH43/45、MH43和MH45等异型通道,而这些通道可降低细胞间的通讯并对磷酸化的作用不敏感.单侧异型GJ通道的偶联率取决于染料注射的方向.
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纳米有机金属框架与精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列短肽偶联佳工艺
目的 优选纳米有机金属框架(IRMOF-3)与精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)序列组成的短肽(RGD)偶联的佳制备工艺.方法 通过RGD对IRMOF-3进行修饰得到RIR纳米粒,并对得到的RIR纳米粒通过红外光谱(IR)、质谱(MS)和扫描电镜(SEM)等手段进行定性分析,以RGD与IRMOF-3的质量比、反应时间、反应温度为考察对象,以偶联率为评价指标,寻找佳工艺条件.结果 IR、MS和SEM显示RGD成功偶联到IRMOF-3表面,并获得RIR佳工艺为A1B2C1,即RGD与IRMOF-3的质量比为1∶1、反应时间为4h、反应温度为-20℃时,可以得到大偶联率的RIR纳米粒.结论 IR、MS、SEM可以强有力地说明RIR纳米粒的成功偶联,且正交试验优化出的RGD与IRMOF-3偶联的优工艺,值得推广使用.
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戊二醛法合成石杉碱甲人工抗原及其鉴定
目的 合成石杉碱甲人工抗原并进行鉴定. 方法 采用戊二醛法,将石杉碱甲与牛血清白蛋白偶联,通过紫外光谱扫描和SDS-PAGE凝胶电泳鉴定偶联是否成功,根据摩尔分子比公式测定其偶联比,并通过L9(33)正交试验考察反应物起始摩尔比、反应时间和戊二醛加入量对偶联率的影响. 结果 人工抗原的紫外光谱扫描与半抗原和载体蛋白的紫外光谱相比均发生变化；人工抗原SDS-PAGE凝胶电泳条带与载体蛋白相比发生偏移；半抗原与载体蛋白的偶联比为10.8∶1.结论 该方法成功合成石杉碱甲的人工抗原,并且确定戊二醛法的佳反应条件为:反应物起始摩尔比100∶1,反应时间8h,戊二醛加入量80 μL.
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诺氟沙星与牛血清蛋白偶联物的合成及偶联率测定
诺氟沙星是一种新型的氟喳诺酮类抗生素,具有强烈的抑菌作用.已广泛应用于临床.测定诺氟沙星在食品中残留的方法大多采用高效液相色谱法.但该法的样品前处理较为复杂,而且重复性较差.笔者通过改良碳二亚胺法[1],将诺氟沙星与牛血清白蛋白进行偶联,再用紫外分光光度法测定已纯化的偶联物的偶联率.为建立特异性的检测食品中残留诺氟沙星的酶联免疫吸附法提供所需抗原的合成方法.
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尿素脂质体偶联抗血管内皮生长因子受体的制备及理化性质
为了提高尿素注射液治疗血管瘤的疗效,降低其副作用,我们研究制备了尿素免疫脂质体,并对其理化性质进行了研究.将血管内皮生长因子受体(VEGFR)的单克隆抗体作为偶联抗体,应用逆相蒸发法及交联法制备尿素免疫脂质体并测定包封率和偶联率,通过透射电镜观察尿素免疫脂质体的特征.结果表明:尿素免疫脂质体剂型稳定,肉眼观为乳白色混悬液,透射电镜下为大单层球形或近似球形结构,直径约150～200 nm,大部分可见到类核仁结构.其包封率约为54.4%,偶联率约为36.84%.医用尿素可以制成尿素脂质体,VEGFR单克隆抗体可作为免疫脂质体的偶联抗体,但需进一步提高包封率和偶联率.
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异型缝隙连接通道和磷酸化对心脏细胞通讯的调节作用
为了检测缝隙连接蛋白(Cx)43和Cx45组成的多种异型缝隙连接通道和磷酸化对缝隙连接(GJ)里细胞通讯的调节作用,将转染了编码为Cx43或Cx45的DNA后的Hela细胞放置在一起共同培养组成双侧和单侧异型GJ通道.显微注射荧光素黄(LY)后,利用紫外光检测经200 nmol/L十四(烷) 酰佛波醇乙酸酯(TPA)处理前后由Cx43和Cx45所组成的多种异型GJ通道对荧光染料的偶联率.结果: 在不同的GJ中, 同型GJ通道Cx43(HoCx43)偶联率高.单侧异型GJ通道Cx43(MH43)和单侧异型GJ通道Cx45(MH45)的偶联率较之相关的HoCx43和同型GJ通道Cx45(HoCx45)低.从Cx45侧注入荧光染料的MH45偶联率较之从Cx43/45侧注射的MH45、双侧异型GJ通道Cx43/45(BH43/45)和HoCx45等的偶联率都低.TPA处理后HOCx43的偶联率降低,而当Cx43和Cx45组合成异型BH43/45和MH43通道其偶联率下降更显著.结论: Cx43和Cx45共同表达可构成BH43/45、MH43和MH45等通道,而这些异型GJ通道可降低细胞间通信和对磷酸化的敏感性.有关MH45通道,其偶联率大小决定于荧光染料的注射方向, 此可能与心律失常再折返的解剖学的机制有关.
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抗HSV1单克隆抗体-阿糖胞苷偶联物制备条件的分步优化
目的:建立高效液相凝胶过滤色谱法测定偶联物的偶联率、中间产物的生成量;通过制备条件分步优化实验来提高偶联率.方法:制备条件从投料比、pH、温度、反应时间等方面来逐项优化反应条件以期能提高偶联率;检测方法采用高效液相凝胶过滤色谱法,以0.02 mol·L-1 pH 6.8磷酸盐缓冲溶液为流动相,流速为0.5 mL·min-1,检测波长为280 nm.结果:通过建立高效液相凝胶过滤色谱法来指导优化实验,摸索得到新的投料比和pH,使偶联率从10.19%提高到13.48%.结论:本实验建立的高效液相凝胶过滤色谱法简便、快速、灵敏、准确,对优化实验有指导意义,使偶联率得到了提高.
关键词： 抗HSV1单克隆抗体 阿糖胞苷 优化实验 凝胶过滤色谱 偶联率 -
PCB77人工抗原的合成及多克隆抗体的制备
目的:制备PCB77人工抗原和多克隆抗体,为建立其免疫学检测方法提供技术准备.方法:以3,4-二氯苯基乙酸为半抗原,在低温和弱碱性条件下,采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将其与载体BSA偶联,制备PCB77的人工抗原,计算结合比为23:1,免疫家兔获得了PCB77的多克隆抗体.采用混合酸酐法将半抗原与OVA偶联,结合比为8:1,用作ELISA检测包被原.间接ELISA检测结果表明,2只兔子的抗血清效价均达1:20 000以上.抗血清经辛酸一硫酸铵沉淀法纯化后通过ELISA检测验证了PCB77人工抗原的有效性,通过方阵滴定法确定ELISA的佳工作浓度,建立标准曲线.在0.75～300 ng/L范围内,抑制率与PCB77的质量浓度对数呈显著的线性关系,检测限达到4.44μg/L.结论:合成的PCB77人工抗原具有较好的免疫效果,纯化后的抗体符合后续实验的条件要求,为研制和开发PCB77免疫检测试剂盒奠定了基础.
