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抑制性RNA文献资料
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抑制性RNA在细胞内对丙型肝炎病毒5′非编码区翻译启动的抑制作用
目的研究核糖体内部进入位点(IRES)特异性抑制性RNA(IRNA)在细胞内对HCV 5′非编码区(NCR)IRES翻译启动功能的抑制作用.方法通过脂质体介导的基因转染方法,转染IRNA真核表达体与带荧光素(luc)的靶基因真核表达载体于人肝癌细胞(HHCC),应用发光仪检测luc报告基因的表达活性.结果 IRNA能有效地抑制由HCV 5′NCR IRES介导的luc基因表达,抑制率高达90%,低50%,而IRNA突变体(mIRNA)无此活性.结论 IRES特异性IRNA能有效地抑制HCV 5′NCR介导的蛋白翻译启动作用.
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HCV IRES特异性抑制性RNA二级结构模拟及自剪切转录载体构建
目的:构建可保证HCV IRES特异性抑制性RNA(IRNA)序列完整性的转录载体. 方法:应用计算机软件模拟IRNA二级结构;体外化学合成IRNA及其互补体的cDNA, 以AatⅡ和XbaⅠ双酶切后克隆入具自剪切作用的顺式核酶载体pGEMRz中;应用酶切方法、PCR和测序法对重组载体进行三重鉴定;后对重组体进行体外转录. 结果:计算机模拟发现HCV IRES特异性IRNA二级结构包括两个环、一个茎状结构和一个膨出,在其序列两端加3～5个碱基不会改变其二级结构,而缺失3～5个碱基却会明显改变其结构.经三重鉴定证实,目的序列被正确地克隆入质粒pGEMRz,并经体外转录得到约70个碱基大小的IRNA. 结论:本研究构建转录载体pGRz-IRNA可保证IRNA 序列的完整性.
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抑制性RNA的抗HCV作用
丙型肝炎基因治疗是目前研究热点.主要策略包括反义核酸策略、核酶策略、细胞内干扰性多肽或蛋白策略、抑制性RNA等,本文仅就抑制性RNA研究进展作了综述.
