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线粒体自噬参与Ox-LDL诱导的THP-1来源泡沫发生发展过程
目的:探索线粒体自噬在泡沫细胞形成过程中的作用。
方法:不同剂量ox-LDL(25μg/ml、50μg/ml 或100μg/ml)分别与THP-M共孵育6、12、24、36、48、60、72 h,油红染色观察THP-M细胞内脂质沉积量,并提取细胞蛋白利用Western blot检测不同阶段泡沫细胞中LC3Ⅱ,Beclin-1, P62和Parkin蛋白的表达量,观察线粒体自噬的变化情况;然后,利用Parkin siRNA干扰Parkin蛋白的表达,ox-LDL(50μg/ml)与THP-M共孵育48 h,通过JC-1 indicator,荧光共定位、western blot、油红染色以及电镜观察Parkin蛋白表达量的变化对线粒体自噬、泡沫细胞形成的影响。 -
人PIRH2b与ARF4相互作用的初步研究
目的 利用酵母双杂交技术筛选PIRH2b的相互作用蛋白.方法 以PIRH2b为诱饵蛋白,利用酵母双杂交技术筛选人胎肝cDNA文库,用GST-pull down验证PIRH2b与ARF4在体外的相互作用,并用绿色荧光蛋白标记PIRH2b,红色荧光蛋白标记ARF4,观察两者在肝癌细胞株Hep3B中的亚细胞定位.结果 利用酵母双杂交筛选到一个能与PIRH2b相互作用的蛋白ARF4,GST-pull down验证了两者在体外的相互作用,荧光标记共定位结果显示两个蛋白共定位于Hep3B细胞的核周区域.结论 首次发现并证实了PIRH2b与ARF4的相互作用,PIRH2b对ARF4的功能可能有重要影响.
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ROS增强iPSC促进皮肤创伤愈合的作用
本研究动态比较诱导性多能干细胞(iPSC)静脉移植和局部滴注方式对皮肤全层创伤愈合的影响及活性氧(ROS)的作用。用H2 O2或N-乙酰-L-半胱氨酸( NAC)预处理调节iPSC内ROS含量。连续12 d拍照测量创口面积并计算创口愈合百分率。于术后第3、5、12天分批处死动物并取材,应用Masson三色染色检测创口组织内的胶原蛋白相对含量以及上皮厚度,免疫组化检测肉芽组织内的新生血管数,实时荧光定量PCR和Western blot技术检测创伤组织内细胞因子和HO-1含量,用荧光共定位的方法探讨iPSC分化为血管内皮细胞的能力。发现局部滴注iPSC促进皮肤创伤愈合的疗效明显优于静脉移植。 iP-SC促进创口愈合,显著提高创缘上皮厚度、皮肤创伤组织的胶原蛋白、TGF-β、IL-1β、MCP-1、HO-1和VEGF水平以及创口肉芽组织内新生血管数,适度H2 O2的预处理增强iPSC的上述作用,NAC的预处理阻断iPSC的作用。 H2 O2的预处理促进iPSC在创伤组织中着床并分化为血管内皮细胞。本研究表明iPSC可促进皮肤伤口愈合,iPSC的正常功能需要适度ROS代谢。