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核纤层蛋白A/C基因 Glu82Lys突变与扩张型心肌病
目的检测中国人家族性扩张型心肌病核纤层蛋白A/C(Lamin A/C)基因突变情况.方法对1个扩张型心肌病家系进行核纤层蛋白A/C基因突变扫描,聚合酶链反应(PCR)扩增核纤层蛋白A/C基因1～12号外显子,测序检测突变.对照为60例正常人及9例无明显家族史的扩张型心肌病伴传导阻滞病人.结果该家系先证者第1号外显子PCR产物测序分析表明该患者核纤层蛋白A/C基因第82密码子位置发生G→A转换,使谷氨酸(Glu)变为赖氨酸(Lys).该患者临床表现劳力性呼吸困难、心动过缓、胸闷、夜间不能平卧,超声示左心室扩大,心电图显示Ⅲ°房室传导阻滞,现已安装起搏器治疗.患者母亲及哥哥皆有相似临床症状且都已于40余岁心衰死亡,其家属有多人死于相同症状.结论核纤层蛋白A/C基因Glu82Lys错义突变位于核纤层蛋白的杆状结构域,有氨基酸的极性改变,该突变表型呈现症状重,发病早,预后差的临床特点,合并Ⅱ-Ⅲ°传导阻滞,提示该突变是致扩张型心肌病的恶性突变.
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生物信息学方法分析前列腺癌组织及细胞系中LMNA基因第七外显子点突变
目的 探讨前列腺癌中核纤层蛋白A/C(lamin A/C,LMNA)基因第七外显子点突变与LMNA表达差异的相关性.方法 采用高通测序分析了永生化正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)、低侵袭力前列腺癌上皮细胞(PC-3M-2B4)及高侵袭力前列腺癌上皮细胞(PC-3M-1E8)LMNA基因的12个外显子,识别出在RWPE-1与PC-3M-1E8细胞系中C.1159C＞ CA(p.L387LI)点突变,定位在1号染色体156106006.为了验证点突变在前列腺癌患者中的分布情况,PubMed GEO数据库下载了3组数据,分别是100例前列腺癌患者石蜡包埋标本的总RNA测序数据、20例前列腺癌和10例配对正常组织的转录组数据及21种前列腺正常及癌细胞株的测序数据.在1号染色体上选取156105950到156106055范围,设置比对序列CTACGCCTG或者NTACGCCTGTCCCCCAGCCC,每次分析比对长度为50 nt.同时,利用GEO数据库分析了突变点周围序列的特点与功能.后,转染突变质粒,蛋白质电泳分析LMNA点突变对LMNA蛋白质表达的影响.结果 在所有分析的样品中,1号染色体LMNA外显子7从156106006到156106011的区域内,存在2种错义突变形式:C/CA(p.L387LI)、C/CG (p.L387LV)和4种同义突变形式:C/CT (p.L387L)、C/CA(p.R388R)、C/CT(p.R388R)、C/CG(p.R388R).前列腺癌按格里森(Gleason score,GS)评分系统分组,错义突变的总发生率分别占40％(正常)、11％(GS5-6)、2％ (GS 7)和6％ (GS 8-10).在16种前列腺癌细胞系和5种前列腺良性细胞系中,错义突变的总发生率分别占31％和60％.此外,还发现1号染色体上从156106008到156106066是转录因子结合位点,常见转录因子为PAX5、HEN1(NHLH1)、HTF、P53、MIF1、COMP1和NGFIC (NGF4).通过功能聚类分析,这些转录因子的功能主要集中在染色质重组及调控、RNA代谢过程的正向调节、组蛋白修饰的调控以及程序性细胞死亡的负调节等方面.高表达突变LMNA的细胞系LMNA及磷酸化LMNA蛋白质表达下调.结论 156106006位点突变多发生在前列腺正常组织和前列腺良性细胞株,与LMNA蛋白质表达密切相关,可能是lamin蛋白质异源性表达的机制之一.
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南京地区汉族人群LMNA基因多态性与代谢综合征的相关性研究
目的 探讨核纤层蛋白A/C(nuclear lamin A/C,LMNA)基因第十外显子第1908位点基因多态性与南京地区汉族代谢综合征的相关性.方法 代谢综合征(metabolic syndrome,MS)患者56例为MS组,体检健康者52例为对照组,比较2组体质量指数(body mass index,BMI)、血压、血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)水平;应用柱式DNA抽提法提取全血基因组DNA,采用Taqman-MGB技术对2组LMNA基因第十外显子1908C/T位点的单核苷酸多态性分型进行检测;将56例MS患者依据是否伴有动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)斑块分为2组,比较MS组与对照组,MS组伴和不伴AS者1908C/T基因型及等位基因频率.结果 MS组BMI[(28.10±2.40) kg/m2]、收缩压[(140.20±14.40)mm Hg]、FPG[(6.26±1.90)mmol/L]、TG[(1.97±1.20) mmol/L]水平均高于对照组[(22.10±2.00) kg/m2、(127.80±16.10)mmHg、(5.21±0.90) mmol/L、(1.26±0.40)mmol/L](P＜0.05),TC、LDL-C、HDL-C水平与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);MS组LMNA1908位点CC基因型频率(45.95％)与对照组(54.05％)比较差异无统计学意义(P＞0.05),CT+TT基因型频率(64.71％)高于对照组(35.29％),但差异无统计学意义(P＞0.05);MS组LMNA基因1908位点T等位基因频率(68.42％)高于对照组(31.58％) (P＜0.05);MS组伴AS者32例,不伴AS者24例,伴AS者LMNA基因1908位点CT+ TT基因型频率(54.55％)及T等位基因频率(61.54％)均高于不伴AS者(45.45％,38.46％),但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 南京地区汉族MS患者发病可能与LMNA基因1908位点T等位基因频率有关.
