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G蛋白偶联受体激酶4在高血压中的研究进展
原发性高血压是心血管系统的常见疾病之一,目前,我国高血压患病率约20％,影响人群超过2亿[1-3],而且呈现继续增高的趋势.原发性高血压可以引起脑血管病,肾小动脉硬化,左心室肥厚,充血性心力衰竭,肾衰竭和猝死等,严重影响着人们的身体健康,因此明确高血压的发病机制显得尤为重要.
关键词： G蛋白偶联受体激酶4 原发性高血压 心血管病 -
G蛋白偶联受体激酶4对内皮素B型受体的异常调节在原发性高血压发生中的作用
目的 探讨G蛋白偶联受体激酶4 (G protein-coupled receptor kinase 4,GRK4)对内皮素B型受体(endothelin receptor B,ETB)的异常调节在原发性高血压中的作用及机制.方法 选用12～14周龄,体质量300 g左右的雄性自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHRs)及其对照鼠(Wistar-Kyoto,WKY)各10只,通过无创鼠尾测压仪测定血压,采用右肾上腺静脉插管灌注ETB受体特异性激动剂BQ3020后观察尿流速及尿钠排泄率,荧光定量PCR检测大鼠肾脏GRK4 mRNA水平,Western blot测定大鼠肾脏GRK4及ETB受体的蛋白表达差异,免疫共沉淀法检测ETB受体磷酸化情况,在动物水平观察高血压状态下ETB受体的功能情况.结果 ETB受体激动剂BQ3020对WKY大鼠有明显利尿排钠作用,且这种利尿排钠作用可以被ETB受体抑制剂BQ788阻断,但在SHR大鼠BQ3020的利尿排钠作用受损[尿流速:(11.23 ±2.16)vs(3.49±1.32),P＜0.05];尿钠排泄率:[(1 551.43 ±393.47) vs (601.16±128.15),P＜0.05];在SHR大鼠肾皮质GRK4的蛋白水平及mRNA水平均较WKY大鼠高[蛋白:(1.38 ±0.10)vs(0.85 ±0.07),P＜0.05];mRNA:[(2.23 ±0.15)vs(0.78±0.16),P ＜0.05],SHR大鼠ETB受体总蛋白水平与WKY大鼠相比差异无统计学意义(P＞0.05),但ETB受体磷酸化水平增高.结论 GRK4可能通过对内皮素B型受体的异常调节,参与了原发性高血压发生与发病.
关键词： 内皮素B型受体 G蛋白偶联受体激酶4 尿钠排泄 原发性高血压 -
大气细颗粒物对G蛋白偶联受体激酶4的异常调节在尿钠排泄中的作用
目的 探讨大气细颗粒物(fine particle,fine particulate matter,PM2.5)对G蛋白偶联受体激酶4(G proteincoupled receptor kinase 4,GRK4)的异常调节及其影响尿钠排泄在高血压病发生、发展中的作用.方法 以Wistar-Kyoto (WKY)大鼠来源肾脏近曲小管上皮细胞(renal proximal tubule,RPT)株为研究对象,观察在PM2.5刺激对细胞活力、Na+-K+-ATP酶活性以及GRK4、D1R表达的变化;以小干扰RNA(siRNA)技术沉默GRK4,观察PM2.5对Na+-K+-ATP酶活性的影响.结果 不同浓度PM2.5(10、50、100 μg/mL)处理WKY大鼠RPT细胞株24h后,细胞活力无明显差异(P＞0.05).PM2.5干预组(100 μg/mL) Na+-K+-ATP酶活性明显高于对照组(P＜0.05),且对10-6mol/L非诺多泮(fenoldopam)的作用较对照组减低(P＜0.05).不同浓度PM2.5(10、100 μg/mL)干预后RPT细胞的GRK4表达明显高于对照组(P＜0.05),多巴胺D1受体的蛋白表达明显低于对照组(P＜0.05).以siRNA技术沉默GRK4后,PM2.5对Na+-K+-ATP酶活性的作用较对照组无明显差异(P＞0.05).结论 PM2.5通过调节GRK4表达,进而调控D1受体的表达和Na+-K+-ATP酶活性,参与了对尿钠排泄的调节.
关键词： 大气细颗粒物 G蛋白偶联受体激酶4 Na+-K+-ATP酶 高血压 -
G蛋白偶联受体激酶4调控小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤的机制探讨
目的 探讨G蛋白偶联受体激酶4(G protein-coupled receptor kinase 4,GRK4)对小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤的影响及其作用机制.方法 取SPF级健康野生型[8周龄、体质量(21.34±0.42)g]和GRK4转基因型[8周龄、体质量(21.87 ±0.68)g] C57BL/6小鼠,各12只.各型分别按随机数字表法分为4组(n=6):野生型假手术对照组、野生型肾脏缺血再灌注损伤组、GRK4转基因型假手术对照组、GRK4转基因型肾脏缺血再灌注损伤组.假手术对照组均采用开腹后不阻断肾动脉血流;缺血再灌注损伤组均采用夹闭肾动脉缺血45 min再灌注24 h,建立小鼠肾脏I/R模型.各组处死小鼠后,取血标本进行肾功能检测(血肌酐、血尿素氮);HE染色观察肾脏病理形态改变,并行肾小管损伤半定量评分;测定肾脏组织中过氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)等氧化应激水平改变;TUNEL染色检测肾脏组织中细胞凋亡情况;蛋白质免疫印记方法检测各组小鼠肾脏组织中GRK4和AT1受体的蛋白表达变化.结果 野生型小鼠肾脏I/R模型后肾功能受损,血肌酐、血尿素氮升高,肾脏小管上皮细胞脱落、死亡(P＜0.05);肾脏组织中GRK4蛋白表达含量增加,差异有统计学意义(P＜0.05).在GRK4过表达小鼠上研究结果发现,过表达GRK4的肾脏在缺血再灌注损伤后,肾功能损害进一步加重;肾脏病理损伤评分明显增加(P＜0.05).肾脏氧化应激水平明显上升,总SOD下降和MDA升高(P＜0.05);肾脏凋亡细胞数目显著增多(P＜0.05).肾脏组织中AT1受体表达量增加(P＜0.05),AT1受体含量的升高可以加重小管细胞氧化应激和凋亡的发生.结论 GRK4可以通过上调肾脏AT1受体表达,增加肾脏氧化应激水平和肾小管细胞凋亡,加重肾脏缺血再灌注损伤.
关键词： G蛋白偶联受体激酶4 肾脏缺血再灌注损伤 血管紧张素Ⅱ1型受体 凋亡 氧化应激 -
父代大鼠长期暴露大气细颗粒物对子代血压及尿钠排泄的影响
目的 探讨父代大鼠长期暴露大气细颗粒物(fine particulate matter,PM2.5)对其子代血压及尿钠排泄的影响.方法 将20只8 ～10周龄,体质量180 ～200 g的雄性SD (Sprague-Dawley)大鼠采用完全随机方法分为暴露组和对照组(n=10).暴露组经气道滴灌PM25混悬液(10 mg/mL,20 μL/次,2次/周,共12周),对照组同法滴灌等量PBS缓冲液.12周后与健康雌性SD大鼠交配分别得到暴露组子代和对照组子代.标准饲料喂养子代大鼠至7～8周龄,体质量180 ～ 200 g,用无创鼠尾血压监测仪测定2组子代大鼠血压,代谢笼法收集24 h尿液并测定尿量、尿钠排泄情况,通过肾上腺动脉灌注多巴胺受体激动剂非诺多泮观察肾脏利尿排钠功能,Western blot检测子代大鼠肾脏组织G蛋白偶联受体激酶4(G protein coupled receptor kinase4,GRK4)、多巴胺Ⅰ类受体(D1DR)蛋白表达情况.结果 与对照组子代相比,暴露组子代血压明显升高[(130.2 ±2.6)vs(113.0 ±0.5),P＜0.05];D1受体介导的利尿排钠功能受损[尿流速:(7.52±1.98)vs(10.71 ±2.05),P＜0.05;尿钠排泄率:(522.8±211.1)vs(990.6±231.0),P＜0.05];子代大鼠肾脏GRK4蛋白水平明显增加[(0.81±0.06)vs(0.67±0.09),P＜0.05],D1受体蛋白表达降低[(0.53 ±0.05)vs(0.64±0.04)].结论 父代大鼠长期暴露PM2.5会引起其子代大鼠成年时期血压升高,可能与PM2.5影响子代肾脏GRK4的表达从而引起D1受体介导的利尿排钠功能障碍相关.
关键词： 空气污染 细颗粒物 高血压 尿钠排泄 G蛋白偶联受体激酶4 -
G蛋白偶联受体激酶4突变A142V基因对大鼠血管平滑肌细胞AT1受体的影响
目的：研究人G蛋白偶联受体激酶4（GRK4）变异体 A142V对大鼠血管平滑肌细胞（VMSCs）血管紧张素Ⅱ1型（AT1）受体及其介导的VMSCs增殖的影响，以期了解 GRK4引起原发性高血压的原因。方法构建与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合表达的慢病毒载体，包装慢病毒，感染A10细胞并进行鉴定；免疫印迹方法检测 AT1受体蛋白变化；采用分光光度法检测GRK4活性，免疫共沉淀检测 GRK4和 A T1受体的共连接；[3 H ]胸腺嘧啶掺入的方法检测增殖变化。结果转染hGRK4γA142V细胞的GRK4酶活性显著升高，AT1受体表达显著升高，GRK4和AT1受体共连接作用降低，AngⅡ刺激细胞增殖效应显著增强。结论转染hGRK4变异体A142V增加GRK4活性，引起AT1受体的功能增强和VMSCs的增殖作用增加。
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G蛋白偶联受体激酶4基因变异与原发性高血压的相关性
目的探讨G蛋白偶联受体激酶4基因变异与原发性高血压的关联.方法应用等位基因特异性PCR结合实时荧光分析的方法,对中国江苏南通地区102例健康人,93例原发性高血压患者的CRK4多态位点A486V进行基因分型,并进行关联分析.结果 V等位基因频率原发性高血压组(56.9%)显著高于正常血压对照组(44.1%),差别有统计学意义(P＜0.05),高血压组中V/V基因型频率(32.4%)明显高于对照组(18.3%,P＜0.05).结论在中国江苏南通地区汉族人中,GRK4多态位点A486V可能与原发性高血压的发病有关,V/V基因型是遗传易患因子.
