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染色体α卫星探针在染色体畸变诊断中的应用
目前临床确诊染色体畸变的主要方法是核型分析,但其检测周期长,诊断结果在一定程度上会受分析者经验影响.近年来,荧光原位杂交(FISH)技术利用非放射性同位素标记核酸探针对分裂间期和分裂期细胞作原位杂交,程序简单、诊断周期短且能识别染色体显带技术难以确认的一些畸变.我们采用人13、21号染色体α卫星探针直接在分裂间期和中期细胞上作FISH,分析13和21号染色体倍性,并着重探讨FISH技术在临床诊断中的应用价值.
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地黄常见种质的染色体观察
地黄 Rehmannia glutinosa Libosch.是一种玄参科多年生草本植物,分布于辽宁、内蒙古、陕西、山西、河北、河南、山东、江苏、安徽、浙江、湖南、湖北、四川等地.其块根入药,年需求量约1.5×107 kg,属于常用中药材.传统认为"怀庆地黄"质量优良.从明朝起,怀地黄的道地地位就已确立,其他地区栽培地黄多引自河南怀庆(现武陟、温县、博爱等县区).怀地黄的主要特点是块大、油性足、有菊花心,至今已有1 000余年的栽培历史[1].为了探讨怀地黄优良品种的形成原因,近年对地黄种质资源进行了收集和整理,经在相同环境中栽培,发现块根膨大与否是由遗传所决定的.通常情况下,栽培作物的栽培品种比其野生类型或野生近缘种产量高,其中一个重要原因是栽培品种的染色体倍性高,在长期的选育和演化中,充分利用了多倍体的"巨大性"[2].那么块根粗大的怀地黄与块根细长的野生地黄之间是否也存在染色体倍性上的不同?本实验选典型的种质材料进行了研究.
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NAA和2,4-D对甘草愈伤组织细胞染色体倍性及次生代谢物的影响
目的 建立甘草愈伤组织细胞高频染色体加倍体系,为获得高产量药效成分的甘草品系奠定基础.方法 采用组织培养法对甘草子叶、下胚轴和胚根进行愈伤组织诱导和染色体加倍；利用紫外分光光度法检测愈伤组织甘草酸、甘草总黄酮的量.结果 NAA、2,4-D不同质量浓度及配比对不同外植体愈伤组织染色体倍性变异具有显著的影响,其中下胚轴2n＞14和2n=28的细胞频率明显高于子叶和胚根,平均为42.38％和25.19％;且子叶、下胚轴及胚根分别在2.0 mg/L NAA、2.0mg/L2,4-D以及1.0 mg/L 2,4-D下,2n＞14和2n=28的细胞频率高,分别为61.50％、39.20％,63.00％、36.23％,63.50％、37.50％.此外,NAA、2,4-D对愈伤组织中甘草酸、甘草总黄酮具有明显的促进效应,在1.0 mg/L NAA+ 1.0 mg/L2,4-D组合下,子叶愈伤组织的甘草酸和甘草总黄酮量均达到高,分别为52.13 mg/g和8.36 mg/g;在2 mg/L NAA下,下胚轴愈伤组织甘草酸及甘草总黄酮量高,分别为49.01 mg/g和8.54 mg/g.相关分析表明,愈伤组织中甘草酸、甘草总黄酮量与2n=28的细胞频率呈正相关.结论 NAA、2,4-D对愈伤组织细胞染色体加倍及甘草酸、甘草总黄酮量提高具有显著的促进作用,通过染色体加倍有可能获得高产量药效成分的甘草品系.
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CD44基因拼接体、p53基因突变和染色体倍性与大肠癌转移之间关系的机理研究
目的:探讨大肠癌CD44v6表达、p53基因突变和染色体倍性与大肠癌转移之间的关系和作用机理.方法:流式细胞仪测定大肠癌细胞倍性及其在细胞周期各相中的分布;RT-PCR方法及特异探针D3对大肠癌细胞进行Southern Blot,并对杂交条带进行辉度扫描;银染PCR单链构象多态性(SSCP)技术检测大肠癌细胞p53基因突变.结果:正常对照、良性腺瘤、肿瘤未转移和肿瘤转移组其CD44v6阳性率和p53基因突变率呈逐渐上升趋势,CD44v6辉度扫描表明肿瘤未转移组(2 317.26±198.73)和转移组(10024.16±855.40)相比较,表达量有显著差异(P＜0.02);CD44v6阳性和阴性两组中G2M期细胞均值分别占6.24%和5.48%(P＞0.05),异倍体细胞分别为62.16%和60.00%(P＞0.5);而p53基因突变和未突变两组中G2M细胞占10.33%和4.01%(P＜0.05),异倍体细胞分别为85.20%和30.00%(P＜0.005);肿瘤异倍体细胞转移率显著高于二倍体细胞.结论:CD44v6的表达与转移高度相关,CD44v6和p53基因突变与肿瘤转移关系可能涉及不同的作用机理.CD44v6与p53基因突变相比较而言,CD44v6不失为一个更好的肿瘤转移标记.
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esp1在A549和Hela细胞中的表达及对染色体倍性的影响
目的 观察esp1(estradiol-stimulated protein)在A549和Hela两种肿瘤细胞株中的表达与染色体倍性的关系.方法 提取肿瘤细胞A549、Hela及分别转染pIRE-S2-EGFP-ESPI的相应肿瘤细胞总RNA,逆转录,real-time quanti-tative PCR检测,比较esp1在肿瘤细胞中的表达变化;VIDEOTEST-KARYO 3.1分析相应的染色体数目变化;流式细胞仪检测其染色体倍性的改变.结果 转染pIRE-S2-EGFP-ESPl后espl表达上调(P＜0.01),染色体数目减少(P＜0.01),染色体倍性降低(P＜0.01).结论 esp1上调表达可以抑制肿瘤细胞异常分裂相,降低染色体倍性,但是esp1在A549和Hela两种肿瘤细胞株中的表达没有观察到明显差异.
