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采用流式细胞术分析MYH9-RD家系血小板膜糖蛋白的表达
目的 分析该非肌性肌球蛋白重链9基因相关疾病(MYH9-RD)家系患者多种血小板膜糖蛋白的表达.方法 采集MYH9-RD家系中11例患者和7名健康对照者的外周血；应用流式细胞术对血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa(CD41/61)、GP Ⅰ a(CD49b)、GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ(CD42a),GPⅠ b(CD42b)和GPⅣ(CD36)进行检测.结果 MYH9-RD家系GPⅡb/Ⅲa(CD41/61)、GP Ⅰ b(CD42b)、GPⅣ(CD36)和GP Ⅰ b/Ⅸ/Ⅴ(CD42a)复合物表达量分别为653.7±192.7、420.0±151.3、667.7±371.3和236.4±64.2,高于对照组(分别为406.7±126.1、181.2±29.3、271.4±91.6和136.1±23.5,P＜0.01),差异具有统计学意义；MYH9-RD家系患者组GP Ⅰ a(CD49b)表达量为192.2±143.4,较对照组(139.1±54.9)稍有下降,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 本MYH9-RD家系患者临床表型复杂多样可能与血小板膜糖蛋白表达量有关.
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Prestin蛋白的稳定高表达卵巢细胞株的建立
建立体外稳定高表达耳蜗外毛细胞马达蛋白(prestin)的多克隆中国仓鼠卵巢细胞株(CHO).方法:采用prestin质粒转染CHO细胞进行表达,高浓度博来霉素400～800mg/L筛选出多克隆细胞株,传代培养,同时长时间维持低浓度抗生素(200～400 mg/L).收集所筛选的多克隆细胞株,提取总RNA,采用针对prestin蛋白不同片段设计的3对引物,进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),对扩增产物进行凝胶电泳分析.采用免疫荧光染色方法鉴定所筛选多克隆细胞株的prestin蛋白表达.结果:采用3对不同的prestin引物的RT-PCR结果均为阳性,而对照组则为阴性；利用prestin蛋白的特异性抗体,对所筛选的多克隆细胞株进行免疫荧光染色鉴定结果显示阳性率＞90％.结论:成功获得稳定高表达prestin蛋白的多克隆CHO细胞株,转染表达率高.
