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纯合子Gly542 Ser导致的遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系分析
目的 探讨姨表近亲婚配的遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系的发病机制.方法家系调查.2015年2月于温州医科大学温州市第三临床学院收治1例遗传性FⅫ缺陷症患者.经用活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)、凝血因子Ⅸ活性(FⅨ:C)、凝血因子Ⅺ活性(FⅪ:C)、FⅫ活性(FⅫ:C)和FⅫ抗原(FⅫ:Ag)测定进行表型诊断.用DNA直接测序法分析先证者F12基因所有14个外显子、侧翼、5′和3′非翻译区及家系成员相应的突变位点区域,用反向测序证实所发生的突变.采用ClustalX-2.1-win软件分析突变氨基酸的保守性,同时采用四个生物信息学评分软件(PolyPhen-2,PROVEAN,SIFT和MutationTaster)分析突变对蛋白质功能的影响.结果 先证者及其弟弟APTT 明显延长,分别为116.4 s 和101.3 s;先证者父亲APTT略延长,为48.8 s,家系其他成员APTT无明显延长;先证者及其弟弟、父亲的FⅫ:C明显减低,分别为2.0%、2.0%和18.0%,FⅫ:Ag含量分别为1.0%、1.0%、和13.0%,表现为交叉反应物质(CRM)阴性.基因测序发现先证者及其弟弟的F12基因启动子区为46T/T型及14号外显子存在c.1681G>A(p.Gly542Ser)纯合突变;先证者父亲、母亲及儿子均存在c.1681G>A杂合突变,其中先证者父亲表现为46T/T型,其余二者均为46C/T型;先证者丈夫启动子区为C/C型,且无上述基因突变.ClustalX-2.1-win软件保守性分析结果表明,Gly542在同源物种间高度保守.四个生物信息学软件对该突变的预测结果一致:Polyphen-2评分(1.000分)、PROVEAN评分(-4.975分)均预示为有害突变;SIFT评分(0.00分)预示可影响蛋白质功能;Mutation Taster评分(0.999分)预示可引起相应疾病.结论 c.1681G>A(p.Gly542Ser)和46T/T与该遗传性FⅫ缺陷症家系FⅫ水平明显降低有关.
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新的纯合子 Leu519 Arg 导致的遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系分析
目的：对一个遗传性凝血因子Ⅻ（FⅫ）缺陷症家系进行FⅫ基因突变的分析和家系调查，探讨其分子发病机制。方法检测先证者及其家系成员活化部分凝血活酶时间（ APTT）、凝血酶原时间（ PT）、凝血因子Ⅷ活性（ FⅧ：C）、凝血因子Ⅸ活性（ FⅨ：C）、FⅪ活性（ FⅪ：C）、凝血因子Ⅻ活性（ FⅫ：C）和FⅫ抗原（ FⅫ：Ag）含量等进行表型诊断；用DNA直接测序法分析先证者FⅫ基因所有14个外显子、侧翼、5′和3′非翻译区及家系成员相应的突变位点区域，用反向测序证实所发生的突变。选择100名健康体检者作对照。结果先证者APTT明显延长为106．4 s，先证者二女儿和外孙女APTT略延长，分别为42．8 s和43．6 s，家系其他成员APTT无明显延长；先证者及其儿子、大女儿、二女儿、外孙女的FⅫ：C明显减低，分别为2．0％、23．0％、23．0％、24．0％和23．0％，FⅫ：Ag含量分别为1．0％、21．0％、23．0％、23．0％和23．0％，表现为交叉反应物质（ CRM）阴性。基因测序发现先证者FⅫ基因启动子区为46T／T型及13号外显子存在c．1556T＞G纯合突变，导致Leu519Arg；先证者儿子、大女儿、二女儿及外孙女为46C／T型，并且发现存在c．1556T＞G杂合突变；先证者妻子启动子区C／C型，且无上述基因突变。结论该家系发现的FⅫ基因13号外显子区c．1556T＞G尚未见报道。 c．1556T＞G影响了FⅫ催化功能，与FⅫ水平的降低有关。（中华检验医学杂志，2015，38：466－469）
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两个遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系临床表型和基因型变化的分析
目的对两个遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系进行临床特性分析和基因突变检测,探讨其参与的分子发病机制.方法2014年10月至2015年3月于上海新华医院收治2例遗传性FⅫ缺陷症患者.经用活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)及FⅫ促凝活性(FⅫ:C)和FⅫ抗原(FⅫ:Ag)测定进行表型诊断;用PCR法对2例先证者的F12基因14个外显子及其侧翼序列进行扩增,PCR产物纯化后直接测序,检测其基因突变.突变位点经直接测序排除多态性,103名健康人做对照.结果2例先证者,分别是34岁男性(先证者-1)和76岁女性(先证者-2),在术前检查时发现凝血时间延长,前者APTT是101s,PT是11.6s,FⅫ:C2％,FⅫ:Ag6％;后者APTT是143s,PT是11.5s,FⅫ:C0.4％,FⅫ:Ag4％;2例先证者的FⅧ:C、FⅨ:C、FⅪ:C和纤维蛋白原(Fg)均在正常范围内,狼疮抗凝物(LAC)检测为阴性;对先证者-1进行F12基因进行检测,发现c.1285C>T(p.Q429stop)的基因纯合突变.家系分析表明该男性的母亲、父亲和儿子在该位点是杂合突变.对先证者-2进行F12基因进行检测,发现c.1556T>C(p.L519P)的纯合错义突变,其2位儿子在该位点为杂合突变.2例家系均发现F1246C/T和619G/C多态性.结论c.1285C>T(p.Q429stop)和c.1556T>C(p.L519P)是导致遗传性FⅫ缺陷症先证者FⅫ缺乏的原因.
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一个遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系凝血因子Ⅻ基因分析
目的 对一个遗传性FⅫ缺陷症家系进行 FⅫ基因突变检测,探讨其参与的分子发病机制.方法 通过活化aPTT、FⅫ:C和FⅫ:Ag等测定进行表型诊断;用PCR技术对先证者及其家系成员FⅫ基因的14个外显子及其侧翼序列进行扩增,PCR产物纯化后,由DNA测序仪进行测序,发现突变位点则反向测序以证实.选择100名健康体检者作对照.结果 先证者及胞弟aPTT明显延长,分别为aPTT79.1s/35 s、aPTT 84.6 s/35 s,大儿子aPTT稍高,为42.1 s/35 s,家系其他成员aPTT正常范围.先证者及胞弟FⅫ:C极度降低,分别为2%、3%,其FⅫ:Ag水平均<1%;胞兄、大儿子和小儿子FⅫ:C明显下降,分别为39%、29%、34%,FⅫ:Ag水平分别为32%、30%、37%.先证者及胞弟FⅫ 1号外显子启动子区46位表现为46T/T型;5号外显子发现5741delc,5742delA,读码框移位,导致Set400Pro;10号外显子发现7142insertC,使得Lys346Gln终止密码子提前出现,产生截短蛋白.此外,家系其他成员:胞兄、大儿子及小儿子发现46T/T和7142insertC;小孙女发现46T/T;侄女、大孙女、二孙女发现46C/T.结论 在该遗传性FⅫ缺陷症家系发现常见的46C/T多态性及exon5区5741delC,5742delA与exon10区7142insertC.5741delC,5742delA及7142insertC与FⅫ水平的降低有关.
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妊娠合并凝血因子Ⅻ缺乏症二例及文献复习
目的 探讨妊娠合并凝血因子Ⅻ缺乏症孕妇孕期母体并发症及母儿结局. 方法 分析2011年11月及2012年2月北京大学人民医院收治的2例妊娠合并凝血因子Ⅻ缺乏症孕妇的临床资料.通过对孕期母体凝血功能、凝血因子Ⅻ活动度的监测及对母体出血、栓塞、产科并发症、围产期处理、母儿结局的分析,结合文献资料,提出对此类患者妊娠期临床监测及处理的建议. 结果 2例孕妇均于孕期检查发现活化部分凝血活酶时间延长、凝血因子Ⅻ活动度降低而明确诊断.孕期监测活化部分凝血活酶时间及凝血因子Ⅻ活动度处于稳定水平.2例均足月分娩,围分娩期均给予预防性血浆输注治疗,母体无产后出血及栓塞发生.新生儿未见异常.随访至产后6周,母儿均未见出血表现. 结论 妊娠合并凝血因子Ⅻ缺乏症患者,如孕期凝血因子Ⅻ活动度处于稳定水平,发生出血和栓塞的风险较低.在临床监测出血、栓塞、凝血因子Ⅻ活动度,围分娩期给予预防性治疗的情况下,母儿可获较理想的结局.
