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锌离子对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞凋亡的影响及机制
目的 研究锌离子对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)凋亡的影响及机制的探索,从而为锌离子在腹膜透析中的应用提供实验基础.方法 胰蛋白酶消化法培养原代大鼠腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组:①对照组;②LPS组;③ZnSO4组;④ZnSO4/LPS组.应用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测RPMC凋亡率,并采用Westen Blot方法检测细胞外信号调节激酶(P-ERK),BAX,凋亡诱导因子(AIF),天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶3(caspase3),天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶9 (caspase9)蛋白表达.应用流式细胞术,采用活性氧自由基(ROS)检测试剂盒检测各组别的ROS蛋白表达情况.结果 与对照组相比,LPS组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白(BAX,AIF,caspase3,caspase9)表达升高(P＜0.01).与LPS组相比,ZnSO4作用组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白表达明显降低(P＜0.01).LPS组ROS显著高于对照组而ZnSO4作用组ROS显著低于LPS组(P＜0.01,P＜0.01).与LPS组相比,ZnSO4作用组P-ERK的表达明显升高(P＜0.01).结论 ZnSO4可能可以逆转LPS所致的RPMC凋亡,对腹膜透析相关腹膜炎过程中所导致的RPMC损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过ERK通路而发挥作用.
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锌离子对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响及机制
目的 研究锌离子对转化生长因子-β1 (TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞转分化(EMT)的影响.方法 常规培养肾小管上皮细胞、传代、分组:①正常对照组;②TGF-β1组(10ng/ml TGF-β1作用48h);③ZnSO4作用组(30μM ZnSO4作用24h后,加10ng/ml TGF-β 1作用48h).采用相差显微镜观察各组细胞表型改变,免疫荧光及Western blotting方法检测波形蛋白(vimentin)、上皮钙黏素(E-cadherin)、I型胶原酶(collagen I)蛋白表达.应用Western blotting检测p-Akt蛋白表达.结果 TGF-β1可以导致肾小管上皮细胞vimentin、collagen I和p-Akt蛋白表达增高,使E-cadherin蛋白表达降低.ZnSO4作用后可有效降低由TGF-β1导致的肾小管上皮细胞vimentin、collagenI及p-Akt的高表达,同时使E-cadherin蛋白表达增多.结论 ZnSO4阻抑TGF-β1所致的肾小管上皮细胞的EMT,其作用可能与PI-3K/Akt信号通路相关.
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ZnSO4对紫外线诱导的大鼠晶状体氧化损伤的保护作用
目的:探讨ZnSO4对紫外线诱导的大鼠晶状体氧化损伤的保护作用.方法:离体培养大鼠晶状体,随机分为三组:(1)阴性对照组(正常组);(2)阳性对照组(紫外线照射);(3)实验组(紫外线照射+ZnSO4).观察晶状体的混浊程度,晶状体组织中GSH-Px和SOD的含量,晶状体上皮细胞中HSP70表达的变化.结果:实验组晶状体混浊程度较同时段阳性对照组轻,差异有统计学意义(P<0.05).紫外线照射后,晶状体上皮细胞中HSP70的表达明显增加,实验组晶状体上皮细胞中HSP70的表达较同时段的阳性对照组显著增加,差异有统计学意义(P<0.05).阳性对照组中GSH-Px和SOD含量显著低于同时段阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组中GSH-Px和SOD含量明显高于同时段阳性对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:在晶状体中,ZnSO4可诱导HSP70的表达进而对晶状体的氧化损伤起到保护作用.
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ZnSO4对变异链球菌生长及生物膜形成影响的研究
目的:观察不同浓度ZnSO4对浮游状态变异链球菌生长、产酸及其生物膜形成的影响.方法:将变异链球菌UA159分别接种于含ZnSO40、1、2、5、10 mmol/L的BHI培养液中,37℃、厌氧培养.分别于培养4、8、12、18、24h检测各组培养液的OD值、pH值,并进行CFU(Colony-Forming Units)计数.同时,将变异链球菌分别于上述各浓度ZnSO4共同培养24 h,使之在盖玻片上形成生物膜；采用CUF计数法观察各组生物膜中细菌数,并运用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察各组生物膜中活菌数及其厚度.实验数据用t检验法进行统计分析.结果:1～10 mmoL/L不同浓度ZnSO4均能抑制浮游态变异链球菌的生长、产酸；并使其生物膜变薄,活菌数减少,且其作用随ZnSO4浓度的增加而增加,各组间差异均有统计学意义(P＜0.05).但是,虽然ZnSO4的浓度为10 mmol/L时能使变异链球菌处于生长停滞状态,却仍有一定的产酸能力,且生物膜内的细菌也未被全部杀死.结论:ZnSO4仅能抑制变异链球菌的生长,无法将其彻底杀灭并阻断其产酸.
关键词： 变异链球菌 ZnSO4 生物膜 激光共聚焦扫描显微镜
