首页 > 文献资料
-
黑斑息肉综合征STK11基因突变分析
目的 检测黑斑息肉综合征(PJS)家系丝氨酸/苏氨酸激酶基因11(STK11)基因突变,分析致病机制.方法 提取家系中患者及正常人外周血基因组DNA,PCR扩增STK11全部外显子及其侧翼序列,扩增后产物纯化后直接进行DNA测序.结果 该家系致病基因突变为STK11第1外显子杂合的碱基置换c.250A>T,为无义突变产生只有84个氨基酸的截短蛋白.结论 该家系致病基因突变为c.250A>T(p.K84?),其致病机制为产生的截短蛋白缺失了大部分的激酶催化域,STK11活性下降的同时,p53的活性也明显下降.该致病基因突变具有较高的肿瘤易感风险,建议家系患者定期临床随访.
-
hLMO3基因全长及截短序列原核表达载体的构建及蛋白诱导表达
目的 构建hLMO3原核全长及5个截短表达载体并鉴定融合蛋白的表达.方法 提取工具细胞HEK293的mRNA,反转录为cDNA,PCR扩增hLMO3全长及截短编码基因,亚克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-2中.在Ecoli BL21中诱导GST-hLMO3全长及截短融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果.结果 hLMO3全长及5个截短基因序列克隆到了原核表达载体pGEX-5X-2中,并经测序鉴定正确.Western blot在EcoliBl21中检测到了相应融合蛋白的表达.结论 成功构建hLMO3全长及5个截短基因序列原核表达载体,在E.coli BL21中诱导表达出GST-LMO3全长及截短融合蛋白.
关键词： hLMO3 工具细胞HEK293 原核表达 截短蛋白 -
呼吸道合胞病毒F1蛋白截短体(F212-489)的原核表达及纯化
目的 原核表达并纯化呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)F1蛋白截短体(F212-489).方法 从质粒pMD-18T-f中PCR扩增截短f1基因(f212-489),经TA克隆测序正确后,将目的片段插入原核表达载体pET-28a,构建重组表达质粒pET-28a-f212.489,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经镍离子亲和层析纯化后,进行Western blot鉴定.结果 重组表达质粒pET-28a-f212-489经双酶切鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为30 000,主要以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的10％;纯化的重组蛋白纯度为85％,可与羊抗RSV多克隆抗体特异性结合.结论 成功表达了RSV F1蛋白截短体(F212-489),纯化的重组蛋白反应原性良好,为更好地研究RSV的免疫机理及通过基因工程方法研制特定部位的亚单位或多肽疫苗奠定了基础.
-
一个家族性腺瘤性息肉病家系的APC基因突变分析
目的 对1个家族性腺瘤性息肉病(familial adenomatous polyposis,FAP)家系的腺瘤性息肉病(adenomatons polyposis coli,APC)基因进行突变分析.方法 通过临床表现、家族史、大肠息肉数、组织病理学等,临床诊断1例FAP患者.提取先证者外周血DNA,进行APC基因所有外显子的PCR扩增及序列分析,发现突变位点后,对先证者的家庭成员进行相应突变位点检测,并对相应PCR产物进行酶切验证,同时用酶切方法对100名无血缘关系的正常对照进行检测.结果 该家系发现一新的无义突变:c.2891T＞G(L964X),该突变国际上未见报道.这一突变造成终止密码子提前出现,在100名无血缘关系的正常人中均未发现此突变.结论 c.2891T＞G(L964X)为该家系的致病性突变.本研究采用测序技术和酶切方法相结合,确保了诊断的准确性.
