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原代脐静脉内皮细胞与脐静脉内皮细胞株的培养方法及生物特性的比较
目的 建立一套成功率高,细胞污染率少,获得较多的细胞数的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的体外分离方法,并且将原代脐静脉内皮细胞与EA.HY926人脐静脉内皮细胞株生物特性进行对比研究,为细胞培养及相关的医学基础研究提供依据.方法 在新鲜(健康剖宫产产妇分娩后立即取新生胎儿脐带,长度15～20 cm,取标本时间≤4 h)脐静脉内注0.1%的Ⅱ型胶原酶消化获得内皮细胞,用M199生长液(含25%的内皮细胞生长因子)进行培养,EA.HY926细胞株用M199生长液.比较两组细胞的形态、超微结构、细胞纯度检测CD31抗体表达.结果 ①形态:原代HUVEC体外生长3～4 d可铺满单层,细胞呈梭形、饱满,漩涡状排列生长,传代后可见管腔样结构; EA.HY926细胞株胞质多颗粒,2～3可铺满单层,可长成复层.②超微结构:透射电镜下,原代HUVEC里可发现较多的横切与纵切的韦伯潘力小体,在EA.HY926细胞株里较少.③细胞纯度检测:CD31抗体的表达率原代HUVEC细胞大于EA.HY926细胞株,两种细胞CD31表达差异有统计学意义(P﹤0.001).结论 脐静脉注Ⅱ型胶原酶消化法配合M199生长液可迅速获取大量内皮细胞,其生物学特性明显优于HUVEC株,而细胞株则以细胞数量多,培养方法 简单,成活率高为特点,两者均是组织工程及相关医学基础研究较好的细胞来源.
关键词： 原代人脐静脉内皮细胞 EA.HY926细胞株 细胞培养 比较 -
原代人脐静脉内皮细胞培养方法经验总结
目的 建立分离培养原代人脐静脉内皮细胞的方法.方法 采用0.125％胰酶+0.01％乙二胺四乙酸(EDTA)消化液灌注法,获得原代人脐静脉内皮细胞,用免疫组织化学方法进行细胞鉴定.结果 原代培养的脐静脉内皮细胞呈典型的铺路石样排列;细胞鉴定可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应.结论 0.125％胰酶+0.01％EDTA消化法能够获取大量且纯度高的原代人脐静脉内皮细胞,为体外实验提供可靠的细胞模型.
关键词： 原代人脐静脉内皮细胞 分离 细胞培养 -
大黄素等中药成分抗肿瘤-血管内皮细胞黏附作用及机制研究
目的:考察活血化瘀中药成分抗肿瘤-血管内皮细胞黏附能力及其机制.方法:运用体外荧光标记肿瘤-内皮细胞黏附模型对中药成分抗肿瘤细胞黏附能力进行考察,并运用Westem blotting实验手段检测相关黏附分子蛋白表达.结果:对几种活血化瘀中药成分进行筛选后发现大黄素具有一定的抗肿瘤-内皮黏附能力,同时可降低内皮细胞黏附分子ICAM-1及E-selectin的表达.结论:大黄素具有抗肿瘤-内皮细胞黏附能力,可能是通过降低黏附分子表达的机制实现的.
关键词： 肿瘤转移 肿瘤细胞黏附 原代人脐静脉内皮细胞 黏附分子 大黄素 -
硫氢化钠对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞的影响
目的 观察硫氢化钠(NaHS,外源性的H2S供体)对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的作用.方法 以0.125%胰酶和0.01%EDTA灌注法获得HUVECs,分别用5.5 mmol/L葡萄糖、25 mmol/L葡萄糖、25 mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS及50 μmmol/L NaHS处理72 h,采用MTT法检测各组细胞的存活率,Western blot法检测H2S生成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-Iyase,CSE)的变化.结果 MTT检测表明,25 mmol/L葡萄糖组的HUVECs存活率比5.5 mmol/L葡萄糖组下降28.37%(P＜0.05),而50 μmol/L NaHS和25mmol/L葡萄糖共同处理组的细胞存活率比25 mmol/L葡萄糖组上升30.3%(P＜0.05),50 μmol/L NaHS组与5.5 mmol/L葡萄糖组无明显差异(P＞0.05).与5.5 mmol/L葡萄糖组相比,以25 mmol/L葡萄糖处理72 h后能使CSE蛋白的表达下降(P＜0.05),而25 mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS则能改善这种损害作用(P＜0.05),CSE蛋白的表达比25 mmol/L葡萄糖组增强.结论 高浓度葡萄糖降低人原代脐静脉内皮细胞的生长和存活率,减少CSE蛋白的表达,而NaHS能够减轻高浓度葡萄糖对CSE的作用.
关键词： 硫氢化钠 高浓度葡萄糖 胱硫醚-γ-裂解酶 原代人脐静脉内皮细胞 -
三种人脐静脉内皮细胞的培养鉴定及表面抗原表达比较
目的 探索建立稳定有效的原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外培养方法,并比较原代HU-VECs与HUVEC-CS、EA.hy926细胞株之间的表面抗原表达情况.方法 Ⅱ型胶原酶消化人脐静脉分离HUVEC,M199完全培养液培养,HUVEC-CS及EA.hy926用DMEM完全培养液.胰蛋白酶消化传代,对三种细胞进行形态学观察,流式细胞仪分析比较表面抗原的表达率.结果 原代HUVECs细胞为多角形,“铺路石样”排列;HUVEC-CS和EA.hy926细胞为圆形或扁平形,生长速度快,呈典型“鹅卵石状排列.vWF因子免疫荧光染色:原代HUVECs 及EA.hy926大部分细胞内可见绿色荧光,而HUVEC-CS为阴性.流式细胞仪分析原代HUVECs(77.7％)或EA.hy926(78.6％)CD31表达率明显高于HUVEC-CS(4.2％),原代HUVECs CD34表达率(43.3％)明显高于HUVEC-CS或EA.hy926(分别为1.6％、0.2％),差异有统计学意义.结论 脐静脉灌注Ⅱ型胶原酶消化法配合M199完全培养液可获得高纯度的内皮细胞,EA.hy926永生细胞株培养方法简单,短时间内可获得足够数量的细胞,两者均是组织工程及相关医学基础研究较好的细胞来源.
关键词： 原代人脐静脉内皮细胞 细胞株 细胞培养 表面抗原表达 -
EA.HY926人脐静脉内皮细胞株与原代细胞生物特性的比较研究
目的 比较培养EA.HY926人脐静脉内皮细胞株与原代脐静脉内皮细胞(HUVECs)的优缺点及生物学特性.方法 通过倒置显微镜、透射电镜形态学鉴定、Ⅷ因子相关抗原免疫组织化学检查及生长曲线测定,比较2种脐静脉内皮细胞的形态、生长曲线等差异.结果 透射电镜观察到原代HUVECs中发现较多WebelPalade小体,而EA.HY926细胞株较少见.免疫组织化学染色Image-Pro Plus 6.0软件进行分析EA.HY926人脐静脉内皮细胞株与原代HUVECs平均光密度值分别为(2 234.02士78.78)、(4 138.80±594.01).原代HUVECs的染色程度明显较EA.HY926细胞株高,差异有统计学意义(P＜0.01).EA.HY926人脐静脉内皮细胞株生长曲线较原代HUVECs稳定.结论 培养原代HUVECs耗时长,生长期较短,易出现杂细胞的污染,细胞的增殖能力有限,花费昂贵.EA.HY926细胞株虽生物特性较差,但其操作简便,具有一定程度的原代HUVECs所具有的生物特性,细胞均一以及增长旺盛,可用于较复杂、细胞创伤较大的体外内皮细胞的研究.
关键词： EA.HY926细胞株 原代人脐静脉内皮细胞 细胞培养 比较
