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左归丸对免疫性卵巢早衰小鼠卵巢GDF-9、BMP-15表达的影响
目的 明确促卵泡发育的卵巢卵母细胞自分泌因子生长分化因子-9(GDF-9)、骨形态发生蛋白-15(BMP-15)的表达不足在免疫性卵巢早衰发病中的重要作用,进一步阐明补肾活血中药复方左归丸通过调节卵母细胞自分泌因子的表达,对卵巢起到保护作用.方法 建立小鼠免疫性卵巢早衰模型:以小鼠透明带3所合成透明带多肽为免疫原.以出现动情周期紊乱、卵巢细胞受损,表示造模成功.然后将造模成功的小鼠随机分为模型组、左归丸高、低剂量组,强的松组、己烯雌酚组和对照组,共灌胃给药4周.免疫组化法检测GDF-9、BMP-15蛋白的表达.结果 模型组与空白对照组相比,GDF-9蛋白表达水平下降,差异显著(P＜0.05),左归丸低、高剂量组及己烯雌酚组与模型组相比,GDF-9蛋白表达水平增加,差异显著(P＜0.05),与空白对照组相比,无显著差异.左归丸高剂量组GDF-9蛋白表达水平也较强的松组增加,差异显著(P＜0.05).模型组BMP-15蛋白表达水平较其余各组减少,但各组相比均无显著性差异(P＞0.05).结论 左归丸对卵巢具有保护作用,能促进卵巢GDF-9蛋白的表达,从而促进卵泡的发育.
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GDF-9和BMP-15在不同品系小鼠中的多态性和生殖能力关联分析
目的 研究GDF-9和BMP-15在繁殖能力不同的品系小鼠ICR和BALB/c中的多态性,为筛选相关的模型动物种群提供参考资料.方法 采用直接测序法筛查多态性位点,并对多态性位点构建双荧光素酶报告基因载体,检测5' UTR对下游基因的影响.结果 ICR小鼠的产仔数是BALB/c的2.8倍左右；在ICR和BALB/c之间发现了GDF-9存在三个多态性位点,一个位于5’端的非编码区,另外两个位于蛋白编码区；双荧光素酶检测结果显示GDF-9的5'UTR区可以促进下游基因的表达.BMP15在两种品系中不存在差异性位点.结论 GDF-9在ICR和BALB/c这两个品系小鼠中存在多态性位点,这些位点的变化对下游基因的表达起一定的促进作用.BMP15在ICR和BALB/c小鼠中不存在多态性位点.
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卵泡发生过程中GDF-9和BMP-15(GDF-9B)的作用
近年来,对卵巢内卵泡发育,即从原始卵泡募集、优势选择、卵泡生长、排卵到黄体形成的调控研究取得了很大的进展.研究表明TGF-β超家族的许多成员在各阶段卵泡发生中起重要的调节作用.TGF-β超家族的两个成员-生长分化因子-9(GDF-9)和骨形态因子-15(BMP-15,或GDF-9B)主要在哺乳动物卵母细胞中表达,对卵泡生长发育起关键作用.本文对GDF-9和BMP-15在卵泡发育过程中的作用进行了综述.
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母源性十溴联苯醚对子代大鼠卵巢和软骨发育的影响
胞GDF-9含量较对照组明显减少(P<0.01);膝关节骺板软骨增厚,软骨表层2型胶原蛋白表达明显减少(P<0.05).结论 孕前和孕期喂灌BDE-209可造成子代大鼠卵巢和软骨发育异常.
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抗苗勒激素及生长分化因子-9对环磷酰胺体外降低大鼠卵巢储备力机制的研究
目的 研究抗苗勒激素(AMH)和生长分化因子-9(GDF-9)对环磷酰胺(Cy)降低卵巢储备力机制中的作用.方法 成年雌性SD大鼠25只,取双侧卵巢组织,并切制成500μm厚的卵巢片,将卵巢片分为7组:空白组、Cy组、Cy+卵泡刺激素(FSH)组、Cy+AMH组、Cy+GDF-9组、Cy+FSH+AMH组、Cy+FSH+GDF-9组,放入含DMEM-F12培养液的培养皿中分别培养2d或4d.除空白组外,其余各组于培养液中分别添加Cy 100 ng/mL、FSH 10 mIU/mL、AMH 100ng/mL、GDF-9 100 ng/mL.利用双抗体夹心酶联免疫吸附技术(ELISA)检测雌二醇(E2)、抑制素B(INHB)的量；光镜下计数始基卵泡(PMF)及闭锁卵泡；运用DNA缺口原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况.结果 ①与空白组相比,Cy组PMF数目明显降低,闭锁卵泡明显增多；Cy+AMH组及Cy+ FSH+ AMH组PMF数目明显多于除空白组之外的其他各组.各组培养4d较培养2d始基卵泡数目明显降低,闭锁卵泡数目明显增多.②与空白组相比,Cy组培养2d和4d时E2及INHB水平明显降低；与Cy组相比,培养2d和4d时Cy+FSH组、Cy+ GDF-9组及Cy+ FSH+ GDF-9组E2、INHB明显升高.与Cy组相比,培养2d和4d时Cy+AMH组及Cy+ FSH+ AMH组E2明显升高.培养4d时Cy+AMH组、Cy+FSH+AMH组INHB水平明显升高.③Cy组与空白组比较,凋亡细胞明显增多；Cy+FSH组、Cy+GDF-9组与Cy组相比,凋亡细胞的数量并没有显著减少.Cy+AMH组、Cy+FSH+AMH组与Cy组相比凋亡细胞的数量显著减少.结论 Cy可加速PMF的募集与耗竭,从而使卵巢储备力降低乃至衰竭.FSH及GDF-9可加速PMF的募集与发育,使更多的PMF进入生长卵泡阶段而受到Cy细胞毒的损害,以致PMF库存逐渐耗竭；AMH可抑制PMF的募集与发育,从而减缓Cy对PMF的加速募集与耗竭,起到保护卵巢储备力的作用.
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GDF-9和BMP-15在子宫肌瘤中的表达
目的:了解GDF-9和BMP-15在子宫肌瘤及邻近正常平滑肌中的表达,为进一步探讨子宫肌瘤发病机制提供实验依据.方法:免疫组织化学方法检测手术切除的子宫肌瘤和邻近平滑肌组织中蛋白的表达;消化法和组织块贴壁法进行子宫肌瘤细胞和邻近平滑肌细胞原代培养,Real-time PCR(RT-PCR)检测所培养子宫肌瘤和邻近平滑肌细胞中 GDF-9和BMP-15的表达.结果:GDF-9和BMP-15 蛋白在子宫肌瘤和邻近平滑肌组织中的表达无统计学差异:消化法和组织块贴壁法2种细胞培养法均建立了有限细胞系,Real-time PCR检测结果显示GDF-9和BMP-15 mRNA在子宫肌瘤细胞中的表达均高于邻近平滑肌细胞.结论:GDF-9和BMP-15在mRNA水平对基因信号调控方面有影响,可能促进子宫肌瘤的增殖、肥大,与子宫肌瘤的发生发展有一定的相关性.
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卵母细胞分泌的因子与IVM
卵子体外成熟(IVM)是一项可以获得成熟卵子的重要辅助生殖技术.但是过去十几年的进展都很缓慢.一个关键的问题是不了解卵子发育能力的组成及调控机制,包括卵子-卵丘细胞缝隙连接的联系,以及这2种细胞之间的双向旁分泌信号作用.通过在体外恰当地操纵卵子-卵丘细胞之间的相互作用,可提高体外成熟卵子授精后的胚胎发育潜能.
