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miR-433负性调控PI3KCA基因在甲状腺癌中表达及作用机制
目的 探讨miR-433对甲状腺乳头状癌(PTC)细胞增殖和致肿瘤性的影响及相关的分子机制.方法 qPCR检测人PTC组织和对应的正常组织、正常甲状腺上皮细胞Nthyori3-1和人PTC细胞系TPC-1、BCPAP及K1中miR-433表达水平.miR-433模拟物及NC-miRNA转染TPC-1细胞,CCK-8测定细胞增殖情况,qPCR和Western blot分别检测miR-433、PIK3CA mRNA和蛋白表达水平.生物信息学软件TargetScan预测miR-433的靶作用位点,并通过qPCR、Western blot和荧光素酶活性实验证实miR-433的靶作用位点.TPC-1细胞共转染miR-433模拟物及PIK3CA过表达质粒,qPCR、western blot、CCK-8和流式细胞术分别检测PI3KCA mRNA、蛋白表达及TPC-1细胞增殖和细胞周期分布;慢病毒介导的miR-433过表达TPC-1细胞分别通过皮下注射的方式注射入裸鼠左右侧,皮下注射后7、14、21、28、35 d分别测量肿瘤体积,以探讨miR-433对体内肿瘤生长的影响.结果 与人正常组织及甲状腺上皮细胞Nthyori3-1相比,PTC组织和PTC细胞中miR-433表达显著下调(P<0.05);CCK-8检测细胞增殖结果表明,与NC-miRNA转染组相比,miR-433转染组PTC细胞增殖速率显著下降(P<0.05),且转染miR-433后,G0/G1期TPC-1细胞比率显著升高,而S期细胞比率显著下降(P<0.05);TargetScan生物学软件预测表明PIK3CA为miR-433潜在的靶基因,荧光素酶实验、qPCR和Western blot结果进一步证实PIK3CA的3'非翻译序列(3'UTR)是miR-433的直接靶点;CCK-8和细胞流式分析结果表明过表达PIK3CA部分逆转了miR-433对TPC-1细胞增殖的抑制作用.结论 miR-433通过靶向作用于PIK3CA基因抑制PTC细胞增殖,其可能为PTC的临床治疗提供新的靶标.
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microRNA-433对人结肠癌细胞系Sw620生物学行为的影响
目的 探讨microRNA-433对人结肠癌细胞Sw620生物学行为的影响.方法 应用细胞转染技术,使Sw620细胞中高表达miR-433并通过实时PCR检测转染效率.将细胞分为con组和高表达miR-433的433组.采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,Transwell小室实验检测细胞迁移.结果 Sw620细胞转染48h后,与con组相比,433组中miR-433表达升高(P＜ 0.001),细胞增殖受到抑制(P＜0.05),细胞迁移受到抑制(P＜0.01),细胞凋亡及细胞周期无明显变化(P＞ 0.05).结论 miR-433抑制Sw620细胞的增殖和迁移,但对细胞凋亡及细胞周期无明显作用.
关键词： miR-433 人结肠癌细胞SW620 细胞增殖 细胞迁移 -
MiR433靶向调控Notch1逆转人乳腺癌细胞对多西他赛的耐药性
目的 探讨miR-433在多西他赛对乳腺癌耐药机制中的作用.方法 将MCF-7乳腺癌细胞暴露于逐渐增强浓度的多西他赛中建立对多西他赛耐药的乳腺癌细胞(MCF-7/DOX),并用miR-433抑制剂及对照剂转染MCF-7/DOX细胞,采用酶标仪(BioTek)测量吸光度和FACS流式细胞仪检测来评估miR-433的功能和作用;通过生物信息学分析、荧光素酶报告基因测定法等技术确定miR-433的下游靶标.结果 实时定量PCR结果显示miR-433在MCF-7/DOX细胞中的表达下调;细胞活力测定结果表明miR-433抑制剂能促进产生多西他赛耐药,并减弱MCF-7细胞的凋亡,而miR-433过表达能增强多西他赛的敏感性并且诱导MCF-7/DOX细胞凋亡.荧光素酶报告基因测定结果显示在miR-433表达显著下调的MCF-7细胞中,Notch1的mRNA和蛋白质表达水平明显增强;miR-433mimics转染的MCF-7/DOX细胞与对照组(mimics-Ctrl)相比,Notch1的mRNA和蛋白表达显着降低.结论 miR-433可通过抑制Notch1的表达来逆转乳腺癌对多西他赛的耐药性,继续发挥药物的有效性.
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Lnc-ATB通过吸附miR-433促进宫颈癌侵袭及转移
目的 检测Lnc-ATB在宫颈癌细胞中的表达及其对宫颈癌细胞侵袭及转移能力的影响,并探索潜在机制.方法 利用QPCR检测Lnc-ATB在宫颈癌细胞及正常宫颈内皮细胞中的表达情况,利用Transwell和细胞划痕实验检测Lnc-ATB对宫颈癌细胞侵袭和转移能力的影响,利用荧光素酶报告基因实验检测Lnc-ATB是否可结合miR-433,利用QPCR检测Lnc-ATB与miR-433之间的调控关系.结果 QPCR结果显示Lnc-ATB在宫颈癌细胞中的表达高于正常宫颈内皮细胞,沉默宫颈癌细胞Lnc-ATB的表达后,细胞侵袭和转移能力受到抑制.荧光素酶报告基因实验结果显示Lnc-ATB可吸附结合miR-433.QPCR实验结果显示沉默宫颈癌细胞Lnc-ATB的表达可促进miR-433的表达.结论 Lnc-ATB在宫颈癌细胞中异常高表达,可通过吸附miR-433促进宫颈癌细胞侵袭及转移.
