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血必净注射液经肌醇需求酶1α信号通路影响组织因子凝血活性
目的 探讨不同浓度血必净注射液对内毒素诱导大鼠内皮细胞组织因子(tissue factor,TF)凝血活性的影响.方法 随机将内皮细胞分为对照组、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组(500 ng/mL)、血必净组(1、5、25μL/mL)、LPS+血必净组(1、5、25μL/mL),培养24、48和72 h后采用CCK-8法检测细胞增殖;留取上清,检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)释放量;以刺激72 h为观察点,采用Western blot技术检测肌醇需求酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1 α)、未剪接型X盒结合蛋白(unspliced-box binding protein-1,uXBP-1)、剪接型X盒结合蛋白(spliced-box binding protein-1,sXBP-1)及蛋白质二硫化物异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)的表达水平;加入Ca2+、凝血因子(coagulation factor,F)Ⅶ和F Ⅹ,用发色底物法检测活化FⅩa水平.结果 与对照组相比,LPS组细胞增殖能力下降,LDH释放增多(P＜0.05),IRE1 d、uXBP1、sXBP1、PDI表达均上调,差异具有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,血必净组细胞增殖能力增强,LDH释放减少(P＜0.05或P＜0.01),随着时间增加,此效应逐渐增强;LPS+血必净组较LPS组细胞增殖活性升高,LDH释放下降(P＜0.05或P＜0.01),RE1α、uXBP1、sXBP1和PDI表达均明显减弱(P＜0.01),FXa产生随IRE1α、XBP1、PDI表达水平降低而减少(P＜0.05),其中LPS+5μL/mL血必净组降低F Ⅹ a效果尤为明显(P＜0.05).结论 血必净注射液能通过阻断IRE1α-XBP1通路,降低PDI的表达,影响内皮细胞TF凝血活性.
关键词： 脓毒症 肌醇需求酶1α 蛋白质二硫化物异构酶 活化凝血因子Ⅹ 组织因子 -
内质网蛋白质折叠分子伴侣在氟尿苷耐药绒毛膜癌JeG-3/FUDRA细胞中的作用
目的 比较氟尿苷(FUDR)耐药的绒毛膜癌(绒癌)细胞系JeG-3/FUDRA细胞和其亲本细胞系JeG-3细胞(FUDR敏感)之间表达差异的蛋白质,探讨其在绒癌耐药发生中的作用.方法 采用双向差异凝胶电泳(2-DE)技术筛选JeG-3/FUDRA细胞和JeG-3细胞之间表达差异的蛋白质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术鉴定差异表达的蛋白质.利用靶基因功能的显著性(GO)分析和途径(Pathway)分析方法对差异表达的蛋白质进行分析和筛选,筛选出目的蛋白质.蛋白印迹法验证JeG-3/FUDRA细胞中目的蛋白质的表达；小分子干扰RNA(siRNA)干扰JeG-3/FUDRA细胞中目的蛋白质的表达后,观察其耐药性的变化.结果 2-DE技术检测显示,在JeG-3/FUDRA细胞和JeG-3细胞中共筛选出46个差异表达的蛋白质,并经MALDI-TOF-MS技术鉴定证实其均为差异表达的蛋白质点；通过GO分析和Pathway分析方法对差异表达的蛋白质进行分析和筛选后发现,内质网蛋白质折叠分子伴侣钙网蛋白(CALR)、蛋白二硫异构酶A3(PDIA3)和相对分子质量为78 000的葡萄糖调节蛋白(GRP78)在耐药细胞中表达均明显增高.蛋白印迹法检测显示,JeG-3/FUDRA细胞中CALR、PDIA3、GRP78蛋白的表达强度明显高于JeG-3细胞.干扰JeG-3/FUDRA细胞中CALR和PDIA3基因的表达后,JeG-3/FUDRA细胞的耐药性分别下降了76.3％(干扰前后分别为36.7±2.0和8.7±3.1,P＜0.05)和51.4％(干扰前后分别为36.7±2.0和17.8±1.2,P＜0.05).结论 内质网蛋白质折叠分子伴侣CALR、PDIA3、GRP78很可能参与了绒癌细胞FUDR耐药的发生.
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蛋白质二硫键异构酶在心血管疾病中作用机制的研究进展
蛋白质二硫键异构酶是一种主要存在于内质网中的巯基-二硫键氧化还原酶。已经证实其具有催化二硫键形成及重排、调节蛋白质的折叠等多种生物学功能，现发现该蛋白也可作为一个潜在的心血管疾病生物学标志物，在急性心肌梗死中可以减少梗死面积和凋亡心肌细胞数目；在糖尿病心肌病中，能降低心肌易损性；在高血压和血栓形成过程中也担任着一个重要的角色。因此，本文主要针对蛋白质二硫键异构酶在心血管疾病发生发展中的机制研究进展予以综述。
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脂联素和蛋白质二硫键异构酶在糖尿病心肌病中的作用研究进展
糖尿病心肌病(DCM)与多种心血管疾病相关,如:猝死、心律失常、心绞痛、心源性休克及心力衰竭等,是糖尿病患者死亡的主要原因之一.因DCM的发病机制复杂,目前尚无明确特效的治疗方案.脂联素是主要由脂肪细胞、心肌细胞分泌的能调控糖脂代谢、保护心肌和血管的细胞因子,其水平降低可导致糖尿病心肌易损性增加,是DCM发病机制之一.蛋白质二硫键异构酶(PDI)是一种多功能的特殊蛋白,也是调节脂联素合成、分泌及多聚体形成的重要蛋白.本文就PDI通过脂联素对DCM的作用进展予以综述.
关键词： 蛋白质二硫化物异构酶 脂联素 糖尿病心肌病 内质网应激 -
PDIA3在腹泻型肠易激综合征患者结肠黏膜中的蛋白表达及其意义
肠易激综合征(IBS)的发病机制尚未完全明了,内脏敏感性增高是其主要的病理生理基础之一.研究显示蛋白质二硫键异构酶A3(PDIA3)在内脏高敏感大鼠结肠黏膜组织中高表达,但其在腹泻型IBS(IBS-D)患者结肠黏膜中的蛋白表达及其意义尚不清楚.目的:探讨PDIA3在IBS-D患者结肠黏膜中的蛋白表达及其作用机制.方法:收集符合罗马Ⅲ诊断标准的15例IBS-D患者和15例健康对照者.采用蛋白质印迹法检测结肠黏膜PDIA3蛋白表达,ELISA法检测结肠黏膜孵育上清液类胰蛋白酶浓度.结果:与对照组相比,IBS-D患者结肠黏膜中PDIA3蛋白表达明显上调,类胰蛋白酶浓度明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).IBS-D患者类胰蛋白酶浓度与PDIA3蛋白表达呈正相关(r=0.750.P=-0.003).结论:PDIA3可能通过促进类胰蛋白酶释放,导致内脏敏感性增高,从而在IBS-D的发病机制中起重要作用.
关键词： 肠易激综合征 蛋白质二硫化物异构酶 类胰蛋白酶类 内脏敏感性
