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环介导的等温扩增与实时荧光PCR检测问号钩端螺旋体的比较
目的 通过比较环介导的等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)与实时荧光PCR( real-time PCR)技术在检测问号钩端螺旋体的特异性及灵敏度方面的差异，寻找一种快速、灵敏且特异性强的问号钩端螺旋体检测方法。方法 根据问号钩端螺旋体lipL41基因序列设计LAMP及实时荧光PCR扩增所用的特异性引物，对我国15群15株问号钩端螺旋体参考菌株进行检测，比较二者在检测的特异性和灵敏度方面的差异。结果 LAMP反应大约可在30 min内完成，整个分析过程不超过1h。Real-time PCR的整个过程大约需要60 min。二者具有相同的检测灵敏度和特异性，低检出限度均为100个拷贝，整个检测过程没有出现假阳性。结论 在检测速度、灵敏度和特异性方面，LAMP技术与real-time PCR技术相当，但LAMP检测技术是在恒温条件下进行，不需要特别昂贵的仪器设备，检测方法简单，在基层实验室及现场检测方面具有明显的优势，是可应用于问号钩端螺旋体检测的一种有效技术。
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乳腺癌前哨淋巴结转移快速诊断的初步研究
目的 建立快速准确、全面客观的判断前哨淋巴结转移状态的分子病理检查方法.方法合成细胞角蛋白19(CK19)的环介导等温扩增(LAMP)引物,应用LAMP技术扩增乳腺癌细胞MCF-7的cDNA,验证引物序列的可靠性;通过RT-LAMP技术分别检测MCF-7、Daudi、Namawal细胞的RNA,验证实验体系的可行性;将手术获取的乳腺癌患者前哨淋巴结行RT-LAMP检测CK19表达,与常规病理学方法的检测结果 相对比,终通过荧光定量以及离心观测沉淀等手段缩短整体检测时间.结果 应用LAMP技术能够检测到MCF-7乳腺癌细胞的CK19表达,而Daudi、Namawal细胞CK19的表达均为阴性;经病理检查证实为癌转移阳性的3枚前哨淋巴结,通过RT-LAMP均检测到CK19表达;经荧光定量及离心观测沉淀等手段优化后反应时间可以缩短至1 h之内.结论 LAMP检测CK19表达,能够准确区分上皮来源细胞和淋巴瘤细胞,检测转移阳性淋巴结的结果 与常规病理学结果 完全符合,其具有简便、准确、快速等优点.
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LAMP法检测超级细菌NDM-1基因
目的 建立超级细菌NDM-1基因的LAMP检测方法.方法 根据目前Genbank上公布的超级细菌NDM-1基因序列,交由商业性的公司化学合成NDM-1全基因,然后以PCR、酶切及测序鉴定基因合成是否成功;再以LAMP法扩增NDM-1基因重组质粒,电泳观察扩增是否成功.结果 经证实化学合成NDM-1基因是成功的;之后进行的IAMP法扩增NDM-1基因也是成功的.结论 成功建立了LAMP法检测超级细菌NDM-1基因的方法,为超级细菌的检测提供了一种可用的方法.
关键词： 新德里金属-β-内酰胺酶-1 环介导的等温扩增 检测 -
E.coli O157:H7 LAMP检测方法的建立
目的 建立检测E.coli O157:H7环介导的等温扩增方法(LAMP).方法 选取E.coli O157:H7的rfbE基因设计LAMP引物.优化建立LAMP检测体系.并用该体系和国标法对76份人工污染样品进行了检测.结果 所建立的E.coliO157:H7LAMP体系具有良好的特异性,用该体系对9属13种41株菌进行检测,结果只有E.coliO157:H7的扩增产物电泳结果为阶梯状条带,非E.coliO157:H7均未产生扩增产物,灵敏性为2.7×101 CFU/mL.样品及培养基对反应体系没有影响或影响很小.对76份样品进行了检测,E.coliO157:H7LAMP检测方法与国标法的总符合率为96.1%,2h内即可完成检测.结论 本研究建立的E.coliO157:H7的LAMP法不但解决了分子生物学检测对实验室仪器设备的高要求问题,而且检测方法简便、快捷,非常便于基层实验室和现场检测使用.
关键词： 环介导的等温扩增 E.coliO157:H7 rfbE -
环介导的等温扩增技术对HBV、HCV和HIV核酸检测的研究
目的 建立环介导的等温扩增技术(LAMP)对HBV、HCV和HIV核酸检测的方法并对检测灵敏度和特异性作初步考核.方法 通过引物设计和筛选、内质控的设计与时间分辨浊度检测方法的运用,建立LAMP HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA扩增体系;用连续稀释的阳性样本和不含任何病毒核酸的正常人血浆考核所建立的LAMP扩增体系的灵敏度和特异性.结果 建立了LAMP HBV DNA扩增体系及HCV/HIV RNA双联检体系,该体系对5 CP/ml的HBV DNA样本的检出率为51.85%,对100 CP/ml的HCV RNA阳性样本的检出率为61.90%,对100 CP/ml的HIV RNA阳性样本的检出率为45%.对考核样本检测的相对灵敏度和特异性均为100%.结论 LAMP HBV、HCV和HIV检测灵敏度较高,在进一步优化以后能用于HBV、HCV和HIV的核酸检测.
