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乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测技术的研究进展
乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝DNA病毒科,它是通过逆转录复制,其复制周期中的关键步骤是双链松弛环状DNA(rcDNA)进入肝细胞核形成共价闭合环状DNA(cccDNA),后者作为病毒mRNA和前基因组RNA(pgRNA)的合成模板,终产生新的病毒颗粒.目前,大多数抗病毒药物并不能有效地清除HBV cccDNA,它是病毒持续感染、抗病毒药物治疗终止后病毒再活化、药物抗性出现的关键原因.此外,HBV cccDNA的检测是HBV感染及抗病毒药物治疗有效的指标.因此,本文主要对HBV cccDNA检测及其研究进展做一综述.
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乙型肝炎cccDNA的检测和临床应用
慢性乙型肝炎仍然是影响人类健康的一个重要问题,全球大约有4亿人感染乙型肝炎,其中中国占很大比例,约3 000万慢性乙型肝炎患者,又约5%终发展成肝硬化或肝癌,每年约有100万人死于HBV感染引起的各种终末期肝病.目前研究发现并不是乙型肝炎病毒直接损伤肝组织,而是细胞免疫应答攻击病毒的同时造成肝组织的损伤,导致慢性肝炎、肝硬化、肝癌[1,2].虽然近年来乙型肝炎抗病毒治疗取得了一定进展,但治疗的疗程、停药后的复发等等问题一直困扰人类.HBV感染的细胞生物学知识展示HBVcccDNA(covalently closed circular DNA)在病毒长期存在、停药后复发和抗药性方面起着重要的作用[3].
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乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的研究进展
共价闭合环状DNA(covalently dosed circular DNA,cccDNA)在HBV的复制及感染状态的建立过程中起着非常重要的作用,现将cccDNA的研究进展总结如下.一、HBV cccDNA的检测方法1.PCR法:PCR法包括普通PCR和定量PCR.由于松弛环状DNA(relaxed circular DNA,rcDNA)在负链和正链上存在缺口,我们可以设计一对跨越两个缺口的引物,由于cccDNA有完整的双链,可以被有选择地扩增.但起始模板量不能太高,否则rcDNA也有可能被扩增,Kock等[1]发现,每个PCR反应管中HBV DNA量在6×105拷贝/ml时能达到佳的灵敏度与选择性.
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乙肝病毒cccDNA检测方法及临床意义的研究进展
共价闭合环状DNA(Covalently closed circular DNA, cccDNA) 是乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)DNA在宿主细胞核内的存在形式,是HBV的原始复制模板,长期存在于细胞核中,目前的药物难以将其清除,成为HBV持续感染和抗病毒药物停用后病情反复的关键因素.检测HBV cccDNA对进一步认识HBV生活周期及指导抗病毒治疗等有重要意义.本文旨在对近年来有关cccDNA的常用检测方法及其临床意义等方面的进展作一综述报道.
