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狂犬病病毒CTN-1V株糖蛋白遗传稳定性研究分析
目的 测定6代次CTN-1V株病毒糖蛋白基因组序列,并研究其致病力稳定性.方法 RT-PCR方法扩增6代次CTN-1V株病毒糖蛋白基因组序列,分别将产物克隆入pGEM-T载体中,测定并拼接序列,应用DNAStar和Mega4.0软件包中的相应软件对基因组序列进行分析,并与近期我国分离且具有地域代表性的狂犬病病毒街毒株进行基因同源性分析；测定6代次CTN-1V株病毒滴度(LD50/ml)和细胞荧光滴度(FFU/ml),采用FFU/LD50指标来对病毒的毒力进行评价.结果 6代次CTN-1V株病毒序列测定结果表明,仅第1222位的G突变为A,导致408位氨基酸由谷氨酸突变为赖氨酸,而1320位核苷酸由A突变为G,但显示为无义突变；5代次CTN-1V株病毒致病力指标均在1.00～1.07之间；糖蛋白生物信息学分析表明,CTN-1V株病毒与我国近期分离的街毒株均具有较高同源性.结论 CTN-1V株病毒糖蛋白传代稳定,且与我国近期分离的街毒株高度同源,各代次CTN-1V株病毒糖蛋白基因组序列的测定及致病力研究,为完善该毒株的质量控制提供数据支持.
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我国人用狂犬病疫苗株病毒糖蛋白生物信息学分析
目的 测定我国人用狂犬病疫苗株4aGV、CTN-1V和PV2061株病毒糖蛋白G基因序列,并对其进行生物信息学分析.方法 RT-PCR扩增3株病毒糖蛋白G基因,分别克隆至pGEM-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,进行测序.应用DNAstar MegAlign软件分析3株病毒糖蛋白的同源性,AntheProt 5.0及DNAstar Protean软件分析3株病毒糖蛋白的结构及潜在B细胞抗原表位的差异.结果 4aGV、CTN-1V和PV2061株病毒均属基因Ⅰ型狂犬病病毒；其糖蛋白G区基因同源性为76.0％～88.4％,G区ORF基因同源性为84.4％～91.5％,氨基酸序列同源性为90.5％～92.2％；3株病毒糖蛋白前19位氨基酸中均存在潜在信号肽结构,其中第19位氨基酸为三者潜在信号肽断裂位点,第17位氨基酸为4aGV株病毒糖蛋白潜在信号肽断裂位点；3株病毒糖蛋白分别在第463～476、464～475及463～475位氨基酸存在潜在可折叠螺旋的疏水性区域,为明显跨膜区域；4aGV、CTN-1V和PV2061株病毒糖蛋白氨基酸残基均富含潜在α螺旋、β折叠及卷曲结构,其比例分别为30％、31％、39％,28％、30％、41％和29％、30％、41％,易发生扭曲、折叠,形成丰富的二级结构；3株病毒糖蛋白潜在B细胞抗原表位位置与数量相似.结论 已对3株人用狂犬病疫苗株G基因进行了全面生物信息学分析,为完善我国人用狂犬病疫苗生产用毒种的质控标准提供了支持.
