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LNA探针同时检测人副流感病毒1,2,3型多重荧光定量RT-PCR方法的建立
目的 人副流感病毒1,2,3型是呼吸道感染的主要病原.本研究建立了特异、快速、灵敏的多重荧光定量RT-PCR方法用于人副流感1,2,3型病毒临床标本检测.方法 针对人副流感1,2,3型病毒设计特异性引物探针,优化荧光RT-PCR反应条件.应用体外转录方法分别制备人副流感1,2,3型病毒的标准品.验证荧光定量RT-PCR方法的特异性,敏感性和稳定性.结果 该方法对人副流感1,2,3型病毒核酸检测有高度特异性,检测的灵敏度HPIV1为10个拷贝,HPIV2为100个拷贝,HPIV3为100个拷贝.可从临床患者鼻咽吸出物标本中直接检出.结论 本研究建立的LNA探针同时检测人副流感病毒1,2,3型多重荧光定量RT-PCR方法具有较高的特异性和敏感性.适用于临床早期诊断和实验室病原谱筛查.
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锁核酸与锁核酸核酶研究进展
锁核酸(locked nucleic acid,LNA)是一种新型、特殊的双环状寡核苷酸衍生物,结构中核酸的2′-0,4′-C位通过不同的缩水作用形成氧亚甲基桥、硫亚甲基桥或胺亚甲基桥,形成了刚性的缩合结构,增加了磷酸盐骨架的局部结构的稳定性.LNA作为一种新的反义核酸,具有与DNA/RNA强大的杂交亲和力、反义活性、抗核酸酶能力、水溶性好和体内无毒性等特点.锁核酸核酶(LNAzyme)是脱氧核酶(DNAzyme)的一种衍生物,是一种经LNA修饰的DNAzyme,即在DNAzyme的两个结合臂上引入一个或几个LNA单体.LNA的引入大大增加了LNAzyme与底物的杂交亲和力,增强了切割反应的酶促活力,使LNAzyme较相应的DNAzyme切割效率明显提高,而且切割的底物既可以是短的RNA,也可以是较长的和结构较复杂的RNA.目前研究表明,作为以寡核苷酸为基础的基因治疗,LNA及LNAzyme有希望成为以后的发展方向.
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一种新型调控基因表达的反义寡核苷酸:LNA
LNA(locked nucleic acid)是新近发现的一种新型调控基因表达的反义寡核甘酸,它以RNA为骨架.亚甲基键连接核糖环中的2′-氧和4′-碳.这种锁套式的结构,增加了LNA与其互补序列的亲和力并为基因表达的调控和微阵列的研究提供了一个新的研究途径.
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实时荧光定量RT-PCR检测乳腺组织中miR-126的表达水平
目的 采用实时荧光定量RT-PCR分析miR-126在乳腺癌及癌旁正常组织中的表达水平,探讨miR-126在乳腺癌疾病中的临床诊断意义.方法 运用ABI-7900HT实时荧光定量仪对20例已由病理确诊的乳腺癌组织及癌旁正常组织的miR-126进行了定量分析.结果 采用配对t检验的统计学方法将乳腺癌与正常组织表达量相比较,发现了miR-126在所有被检测的乳腺癌组织中有不同程度的表达水平下调,且结果有显著差异(P<0.0001).结论 乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中存在上述miR-126表达水平的改变,实时荧光定量RT-PCR方法检测miRNA-126水平在乳腺癌早期诊断和治疗方面提供了新的思路并具有广阔的应用前景.
