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转运膜蛋白21文献资料
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siRNA干扰跨膜转运蛋白21的表达对KO小鼠胚胎成纤维细胞γ分泌酶活性的影响
目的 探讨跨膜转运蛋白21(TMP 21)对γ分泌酶活性的影响.方法 将淀粉样前体蛋白基因缺陷型KO小鼠胚胎成纤维细胞[MEF(KO)]分为转染组(T)和对照组(C),转染组转染载有TMP 21小分子干扰RNA(siRNA)的质粒,对照组转染空质粒.每组均制备包含细胞全膜蛋白的样品(T1、C1),经CHAPSO进一步溶解后超速离心制备所得纯化全膜蛋白样品(T2、C2),用γ分泌酶组分早老蛋白1(PS-1)特异性抗体免疫沉降C2或T2后获得的γ分泌酶样品(IPT2、IPC2).蛋白质印迹法检测各类样品中γ分泌酶重要组分TMP 21、PS-1和Nicastrin(NCT)蛋白表达量;应用ELISA法检测β淀粉样肽40和β淀粉样肽42的生成总量.结果 蛋白质印迹法检测显示,TMP 21蛋白表达量在转染组样品IPT2中为5294±247 ng/ml,在对照组样品IPC2中为19110±579 ng/ml,组间差异有统计学意义(P<0.05);各类样品中PS-1与NCT蛋白表达量无明显变化;TMP21可与PS-1共沉降.ELISA法检测显示,转染组样品IPT2与饱和浓度底物C99反应生成的β淀粉样肽40和β淀粉样肽42总量为348±18 pg/ml,对照组样品IPC2为与饱和浓度底物C99反应生成的β淀粉样肽40和β淀粉样肽42总量为342±18pg/ml,组间差异有统计学意义(P<0.01).结论 TMP 21可能为γ分泌酶的组分之一.在TMP21蛋白低表达状态下γ,分泌酶活性升高,提示TMP 21为γ分泌酶的负调控因子之一.
