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等位基因特异性引物和TaqMan-MGB探针双抑制野生等位基因扩增的实时荧光定量PCR检测JAK2V617F突变率
本研究建立在外周血基因组DNA中定量检测JAK2V617F突变率的荧光定量PCR检测方法并探讨其临床应用价值.在实时荧光定量PCR分析系统中,应用等位基因突变引物和等位基因野生TaqMan-MGB探针共同抑制JAK2 V617F野生等位基因扩增,从而特异性地扩增JAK2V617F突变等位基因.通过测定不同JAK2V617F突变率标准品及其循环阈值(Ct值),建立JAK2 V617F突变率定量测定方法,并对89例表观健康人外周血基因组DNA中JAK2V617F突变率进行检测.结果表明,建立的方法定量检测JAK2V617F突变率的下限为0.1％,检测JAK2V617F突变率的批内、批间平均变异率分别为4.1％和6.1％.对89例表观健康人外周血基因组DNA中JAK2V617F突变率检测显示,其中2例为JAK2V617F阳性,突变率分别为0.64％和0.98％.结论:建立的JAK2V617F突变率定量检测方法具有检测灵敏度高和重复性好的特性,适合骨髓增殖性疾病的诊断及疾病进程和疗效监测.本方法检测原理可用于各种单碱基突变率的检测,具有广泛的应用前景.
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LKB1基因多态性与2型糖尿病相关性研究
目的:探讨陕西汉族人群中LKB1基因位点rs741765 (380C＞T)及rs6510599(459G＞A)单核苷酸多态性(SNPs)与2型糖尿病遗传易感性及相关临床代谢指标的关系.方法:采用等位基因特异性引物PCR(SASP-PCR)对2型糖尿病患者130例及健康对照组100例进行LKB1基因内含子6 rs741765 (380C＞T)及内含子1 rs6510599(459G＞A)两个位点进行基因多态性筛查,并测序鉴定,分析其基因多态性位点与2型糖尿病临床代谢指标关系.结果:rs741765(380C＞T)基因突变情况:2型糖尿病患者TT基因型频率显著高于健康对照组(P=0.023);TT基因2型糖尿病组中糖化血红蛋白水平及低密度脂蛋白胆固醇水平在型中明显升高(P=0.030;P=0.002);健康对照组中,空腹血糖水平在TT基因型中明显升高(P=0.011).rs6510599(459G＞A)基因突变情况:AA基因型频率在2型糖尿病组及健康对照组间无显著性差异(P＞0.05);该基因位点与临床指标亦无相关性(P＞0.05).结论:陕西汉族人群中LKB1基因内含子6 rs741765(380C＞T)及内含子1 rs6510599(459G＞A)存在基因多态性.LKB1基因内含子6 rs741765(380C＞T)基因多态性与2型糖尿病的发病有相关性.LKB1基因内含子l rs6510599(459G＞A)基因多态性与2型糖尿病的发病无相关性.
