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冷冻保存血小板的研究进展
冷冻保护剂和添加液的正确选择是保证冷冻血小板质量的重要因素.冷冻血小板体内即刻止血功能明显优于液体保存血小板.为更好地保证冷冻血小板的质量,了解二甲亚砜(DMSO)在冷冻血小板保存过程中的作用及其作用机理、DMSO冷冻血小板止血功能增强的机理及不同因素对冷冻保存血小板的影响具有重要意义.本文就冷冻血小板的长期保存及质量标准、DMSO引起冷冻血小板分子改变及抑制激活作用的机理、不同因素对冷冻血小板保存效果的影响、保存效果的检测、冷冻血小板在灾害救援和军事行动中的应用及犬冷冻血小板的研究进行综述.
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亚硝基谷胱甘肽对冷冻血小板膜糖蛋白分子的影响研究
本研究探讨亚硝基谷胱甘肽(S-nitrosoglutathione,GSNO)对冷冻血小板膜糖蛋白分子的影响.用流式细胞术对新鲜血小板、冷冻血小板及加入GSNO后的冷冻血小板的膜糖蛋白分子进行测定并进行比较.结果表明:GSNO明显降低了血小板的聚集率;PAC-1变化不显著;CD42b、CD62P变化在新鲜液态血小板组与冷冻血小板组、加有GSNO的冷冻血小板组差别显著;冷冻血小板组、加有GSNO的冷冻血小板组的血小板膜糖蛋白变化差别不显著.结论:GSNO抑制血小板的聚集,保持血小板的功能,可以用作冷冻保护剂.加入GSNO的冷冻血小板可能存在分子重排、结构上的变化及其它作用机制.
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利用SCID小鼠模型评价-80℃冷冻人血小板的体内生存能力
为了评估人血小板-80℃冷冻保存后在活体内的生存能力,取新鲜机采血小板加入二甲基亚砜(DMSO),使其终浓度为5%,于-80℃保存10天后,取出立即放置于37℃水浴箱中快速解冻,并离心浓缩10倍.用带有超细针头的胰岛素注射器抽取浓缩血小板100 μl,经尾静脉注入重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内,在注入0.5、2、4、6、12、24小时时采集小鼠全血,肝素抗凝,用CD61-PE标记后,流式细胞术计数人血小板,以30分钟时的人血小板计数为100%,计算人血小板存活率.结果表明:冷冻血小板在活体内存活率明显降低,新鲜血小板和冷冻血小板输注SCID小鼠体内4小时时的存活率分别为(79.5±9.1)%和(40.6±6.6)%(p＜0.01),推算半寿期(T1/2)分别为7小时和2.5小时.结论:血小板-80℃冷冻保存后在活体内的生存能力降低.
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血小板保存3天后再冷冻保存的实验研究及临床应用
本研究探讨血小板常温保存3天后再进行-80℃冰箱内冷冻保存及临床应用的可行性.对当天冷冻和保存3天后再冷冻血小板进行了计数,并检测聚集力、黏附力以及CD62p的表达,并通过可对比性病例观察保存3天后再冷冻与当天冷冻血小板临床应用的可能性.结果表明:在保存期3天之内血小板数量、低渗性休克反应、黏附功能无显著差异性改变(p＞0.05),但聚集功能和CD62p的表达率的变化有显著性差异(p＜0.05).当天保存并冷冻的血小板与保存3天后再冷冻的血小板各项指标的变化都无显著性差异.CD62p的再表达率(CD62p凝血酶激活后阳性率-CD62p激活前的阳性率)也无显著性差异,分别是51.1±4.5和51.1±4.4(p＞0.05).临床应用当天冷冻和保存3天后再冷冻血小板的CCI值分别是48%和49%,无显著性差异(p＞0.05).结论:血小板保存3天后可以再-80℃冷冻保存,其临床应用效果与当天冷冻血小板比较后无明显差异.
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亚硝基谷胱甘肽对冰冻血小板聚集及一氧化氮含量的影响
本研究探讨亚硝基谷胱甘肤(GSNO)对冷冻血小板聚集及一氧化氮(NO)含量的影响.用血小板聚集仪对血小板的聚集率进行测定,用硝酸还原酶法对NO含量进行检测.结果表明,新鲜液态血小板的聚集率为(63.44±2.96)％,冷冻血小板的聚集率为(35.47±2.93)％,加入GSNO后的冷冻血小板聚集率为(24.43±3.07)％.32例正常献血者新鲜液态血小板的NO浓度为(31.59±16.88) μmol/L.32例冷冻血小板的NO浓度为(22.16±6.38) μmol/L,明显低于新鲜液态血小板组.32例加入GSNO的冷冻血小板NO浓度为(45.64±6.31)μmol/L,明显高于新鲜液态血小板组.结论:GSNO增加了冷冻血小板NO的浓度,抑制血小板的聚集,保持血小板的功能,可以用作冷冻保护剂.
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冷冻血小板的稳定性研究
目的 探讨冷冻血小板融化复苏后的稳定性.方法 将血小板分别置于-80℃和-85℃～-120℃保存,观察冷冻血小板融化复苏后纤维蛋白及絮状不可逆聚集的情况.结果 -80℃保存血小板纤维蛋白及絮状不可逆聚集率为24.0%,-85℃～-120℃保存血小板纤维蛋白及絮状不可逆聚集率为0.血小板保存温度不同,纤维蛋白及絮状不可逆聚集发生率的差异有显著性(χ2=243.18,P＜0.01),冷冻血小板冷冻速度和保存温度对血小板质量的影响有显著性.结论 冷冻血小板于-85℃～-120℃保存的稳定性更好.
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超低温保存血小板的制备与临床应用
血小板在成分输血中越来越显得重要,主要是血小板在止血和凝血过程中起到极其重要的作用.单采新鲜血小板于22±2℃条件下保存,容易发生细菌污染而引起输血反应,5 d保存期短很容易过期.不能满足临床输血紧急需求,供求矛盾突显.冰冻保存是延长血小板效期的佳选择.冰冻保护剂有聚乙烯咯烷酮(PVD)、聚乙二醇(PEG)、Thrombosol,也有甘油、甘露醇、羟乙基淀粉等.目前常用的大多使用5%～6%的二甲基亚砜(DMSO)[1].笔者就当前超低温保存冷冻血小板(下称冷冻血小板)的制备和临床应用情况作简要的综述.
