首页 > 文献资料
-
转瓶培养与生物反应器微载体培养重组腺病毒的比较
目的 分别用3L转瓶和7L生物反应器微载体系统培养人胚胎肾细胞(HEK-293细胞)并接种H3型流感重组腺病毒,比较两种方法培养细胞及重组腺病毒的效果. 方法 分别用3L转瓶和7L生物反应器培养HEK-293细胞.转瓶每24 h取样,生物反应器每12 h取样,记录细胞总数.待细胞长满表面85％～90％时接种流感重组腺病毒,完全病变后收取病毒液并测定病毒滴度. 结果 转瓶培养HEK-293细胞3d,细胞增殖增加1.85～2.45倍,为(3.71～4.90)×107个[(2.95～3.90)×104 cells/ cm2],生物反应器培养3d,细胞增长4.72～5.00倍,为(132.15～140.09)×107个[(24.88～28.72)×104 cells/cm2].转瓶培养重组腺病毒滴度为6.85 TCID50/ml,生物反应器微载体系统培养腺病毒滴度为7.200 TCID50/ml. 结论 生物反应器微载体系统培养流感重组腺病毒数量和滴度均高于转瓶培养,不但提高了疫苗的产量,还减少了细胞分泌物的残留,增强了疫苗接种的安全性.
-
不同材质细胞培养容器培养甲型肝炎病毒的比较
目的 比较中性玻璃转瓶和聚苯乙烯细胞工厂两种材质的培养容器培养人二倍体细胞和甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)的差异.方法 采用相同的培养条件,在中性玻璃转瓶和聚苯乙烯细胞工厂中分别培养人胚肺二倍体细胞KMB17,并接种HAV H2株,倒置光学显微镜下观察细胞的形态变化;细胞接种病毒后第0、7、14、18、22、26、30天时取样,ELISA法测定病毒的感染性滴度,分析病毒的增殖动力学.结果 两种材质的容器培养的KMB17细胞的生长状态和形态无明显差异;HAV H2株增殖动力学相似;单位体积病毒收获液中的病毒产量无显著差异;聚苯乙烯细胞工厂培养的HAV的单位培养容积产量是中性玻璃转瓶的7.28倍.结论 聚苯乙烯细胞工厂和中性玻璃转瓶培养的人二倍体细胞和HAV均能良好生长,细胞工厂可替代转瓶成为新的疫苗规模化生产的细胞培养技术.
-
昆虫细胞Sf9在四种生物反应器中的培养
昆虫细胞表达系统已广泛的应用于表达各种重组蛋白,研究昆虫细胞Sf9分别在4种生物反应器:转瓶、摇瓶、Bellocell反应器、发酵罐中进行悬浮培养.转瓶、摇瓶、Bellocell和发酵罐的细胞接种密度都是5×102/mL.对细胞数量、葡萄糖浓度以及主要代谢产物乳酸、氨的浓度进行检测.昆虫细胞经转瓶和摇瓶培养,细胞密度达到高分别为:5.5×106、7.3×106/mL,是起始密度的11倍和14.6倍.昆虫细胞经Bellocell和发酵罐培养,细胞密度达到高分别为:8.01×106、1.52×107/mL,是起始密度的16.02倍和30.4倍.昆虫细胞经四种生物反应器中的悬浮培养之后,都达到了很高的密度,尤其是经发酵罐培养达到如此高密度,为高效大规模表达药物蛋白,奠定重要的基础.
关键词： 昆虫细胞sf9 转瓶 摇瓶 Bellocell反应器 发酵罐 -
转瓶培养与生物反应器微载体培养乙脑病毒的比较
分别用15L转瓶与15L生物反应器微载体(2.5g/L Cytodex Ⅲ)系统培养Vero细胞并接种乙型脑炎病毒(简称乙脑病毒).转瓶培养Vero细胞7～8d,细胞数高能达到8 ×10(8);当单层细胞长至3.0～4.5×10(8)时接种乙脑病毒,病毒滴度能达到6.5～6.981g PFU/ml,并能够连续收获4～5次;采用微载体系统培养Vero细胞,细胞密度高能达到170×10(8);当单层细胞长至60～70×10(8)时接种乙脑病毒,病毒滴度能达到7～7.51g PFU/ml,并能够连续收获13～15次.两种方式培养的乙脑病毒收获液分别经灭活、浓缩、柱层析纯化后制备Vero细胞乙脑纯化疫苗,各项检定指标均符合<中国药典>的相关要求.
-
原代地鼠肾细胞及狂犬病毒不同培养方式的研究
目的 通过比较原代地鼠肾细胞在转瓶、微载体、细胞工厂的3种培养方式的培养效果,为原代地鼠肾细胞选择一种易扩大规模、培养高质量细胞的培养方式,进而提高狂犬病毒的产量.方法 消化取得的细胞悬液分别在转瓶、微载体、细胞工厂中培养,通过显微镜观察细胞形态、计数等结果比对培养的差别.结果 细胞工厂可以很好地培养原代地鼠肾细胞和狂犬病毒；而细胞在微载体上贴附性差,生长不好.结论 实验结果表明细胞工厂可以取代转瓶,用于大规模培养原代地鼠肾细胞扩大狂犬病毒的产量.
-
牛肾细胞在两种不同载体中培养效果的比较
目的 通过牛肾细胞在两种不同载体中培养效果的比较,为牛肾细胞在细胞工厂中规模化生产提供真实的、有力的支持.方法 不同代次牛肾细胞在两种载体中经过相同培养条件进行培养.结果 实验中原代牛肾细胞在细胞工厂接种密度为5.5×104/cm2左右,在15 L转瓶接种密度为9.0×104/cm2左右.一代牛肾细胞在细胞工厂接种密度为6.5×104/cm2左右,在15 L转瓶接种密度为10×104/cm2左右.二代牛肾细胞在细胞工厂接种密度为7.0×104/cm2左右,在15 L转瓶接种密度为14×104/cm2左右.两种载体中牛肾细胞生长状况均能达到培养要求.结论 细胞工厂能在有限的空间内利用大限度的培养表面培养牛肾细胞,不仅节约了传代前的细胞用量,而且提高了培养后的细胞产量.
