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A型核纤层蛋白的研究进展
A型核纤层蛋白由LMNA基因编码,为核纤层的主要成分,呈动态网状结构,位于核膜下层,起重要的机械支持作用,直接或间接与染色质相互作用,在维持染色质结构、转录、DNA复制和细胞凋亡等方面发挥重要作用.LMNA基因及其编码蛋白lamin A/C异常能引起一组人类遗传病,称为核纤层蛋白病.为深入了解A型核纤层蛋白的正常生理功能及其在相关核纤层蛋白病中的作用,本文就A型核纤层蛋白的结构分类、修饰组装、动力学、相互作用蛋白及相关核纤层蛋白病等方面进行综述.
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A型核纤层蛋白的C端相互作用蛋白的筛选及鉴定
目的:筛选A型核纤层蛋白(lamin A)相互作用蛋白,探讨lamin A造成细胞早老的机理.方法:以lamin A的C末端区域为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法从人骨骼肌cDNA文库中筛选lamin A相互作用蛋白.并采用GST-Pull down实验和western blotting进行鉴定.结果:筛选得到包括MT-2A在内的14个候选相互作用蛋白.MT-2A与lamin A能相互作用.结论:MT-2A在细胞外与lamin A相互作用.
关键词： 酵母双杂交 A型核纤层蛋白 衰老 GST-pull down -
A型核纤层蛋白——多种结合蛋白共同的"脚手架"
A型核纤层蛋白是核纤层的组成成分,由LMNA基因编码,是核内许多蛋白分子的共同锚定物,A型核纤层蛋白及其结合蛋白的基因突变会导致一系列组织特异性疾病,称为核纤层疾病(laminopathies).为深入了解A型核纤层蛋白复合体的功能,探索核纤层疾病的发病机制,有必要重新审视其相应的结合蛋白.本文总结了目前所发现的A型核纤层蛋白的结合伙伴,将其分为4组:建筑伙伴、染色质伙伴、基因调节伙伴和信号传递伙伴.并概述了它们的特点及其在体内依赖于核纤层蛋白的功能通路.基于现有知识推测由许多成分组成的核纤层相关复合体与核结构、信号转导和基因调节有关.探究这些想法会加深我们对核功能及其相关疾病的理解.
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培哚普利联合厄贝沙坦调节扩张型心肌病大鼠AT1受体和lamin A表达
目的:探讨培哚普利联合厄贝沙坦对扩张型心肌病(DCM)大鼠心肌血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1Rs)和核纤层蛋白A(lamin A)mRNA表达的调节.方法:腹腔注射阿霉素建立SD大鼠DCM模型.13周后大鼠分为4组:A组为正常大鼠,B组为DCM大鼠,均不予药物干预;C、D组均为DCM大鼠,C组予以培哚普利,D组予以培哚普利联合厄贝沙坦.超声心动图检测大鼠左室射血分数(LVEF);RT-PCR方法检测AT1Rs、lamin A表达.结果:(1)C、D组干预后LVEF明显升高(P＜0.01),D组LVEF高于C组(P＜0.05).(2)与A组比较,B组AT1Rs表达下调(P＜0.05);与B组比较,C、D组AT1Rs表达上调(P＜0.05),D组AT1Rs表达上调更明显.(3)与A组比较,B组lamin A表达下调(P＜0.05);D组lamin A表达水平高于B组(P＜0.05).结论:DCM的发展伴随心肌AT1Rs及lamin A表达下调.培哚普利联合厄贝沙坦使AT1Rs表达明显上调及lamin A表达上调,有利于DCM心力衰竭的治疗.
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A 型核纤层蛋白在腰椎退行性疾病中的表达及其意义
目的：初步探讨A型核纤层蛋白（Lamin A）在腰椎退行性疾病中的表达特点及意义。方法将74例腰椎退行性疾病患者分为腰椎间盘突出组（32例）及腰椎管狭窄组（42例），另设腰椎正常组（12例）作为对照。采用免疫组织化学检查（免疫组化）及蛋白免疫印迹法检测 Lamin A在3组腰椎间盘组织标本中的表达情况。结果免疫组化显示 Lamin A 在3组的椎间盘细胞中均有表达，腰椎管狭窄组的 Lamin A 在椎间盘细胞中的表达较腰椎正常组及腰椎间盘突出组明显；蛋白免疫印迹法检测3组椎间盘的纤维环组织均有 Lamin A 的表达，腰椎管狭窄组 Lamin A 条带灰度值为3．55±0．16，腰椎间盘突出组为1．02±0．13，腰椎正常组为0．78±0．14，3组比较差异有统计学意义（F＝14．326，P ＜0．01），腰椎管狭窄组与腰椎间盘突出组及腰椎正常组比较差异均有统计学意义（P 均＜0．001），腰椎间盘突出组与腰椎正常组比较差异尚未有统计学意义（P ＝0．134）。结论随着腰椎退行性疾病病程的发展，Lamin A 的表达逐渐升高，其可能与腰椎退行性疾病的发生、发展有一定联系。
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AHA1蛋白与A型核纤层蛋白在细胞中的共定位
目的 构建AHA1与荧光蛋白GFP融合的真核表达载体,并在HEK293细胞中进行表达,然后检测AHA1重组蛋白在细胞中的表达,以及与A型核纤层蛋白在细胞中的共定位.方法 提取HEK293细胞中总RNA,随之逆转录成cDNA,然后设计引物扩增AHA1的编码序列后构建到pEGFP-N1载体中,转染HEK293细胞后,通过免疫印迹检测重组AHA1蛋白在细胞中的表达,采用激光共聚焦显微镜观察重组AHA1蛋白与A型核纤层蛋白在细胞中的共定位.结果 经PCR和DNA限制性内切酶鉴定,后通过DNA测序并进行序列相似性分析比对,确定pEGFP-N1-AHA1重组质粒构建成功；在HEK293细胞中转染pEGFP-N1-AHA1重组质粒后,检测发现,重组AHA1蛋白在细胞中已经成功表达,并且部分AHA1蛋白与核纤层蛋白A共定位于细胞的核膜上,但是AHA1蛋白与核纤层蛋白C在细胞中不能共定位.结论 成功构建了AHA1与GFP荧光蛋白的重组质粒,并且AHA1蛋白与核纤层蛋白A在细胞中能够共定位,而不与核纤层蛋白C共定位.
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A型核纤层蛋白基因突变与扩张型心肌病
A型核纤层蛋白决定细胞核的大小及形状,与细胞核的稳定性、染色质结构以及基因表达有关.A型核纤层蛋白基因突变是扩张型心肌病病因之一,目前已经发现许多与扩张型心肌病发病相关突变位点.A型核纤层蛋白基因突变引起心肌细胞核膜破坏,核纤层蛋白与其他核膜蛋白、染色质连接异常;进一步引起心肌细胞功能失常,影响转录、染色体的构成和细胞收缩功能,导致扩张型心肌病的发生.
