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骨髓基质细胞条件培养液调节神经干细胞分化有效成分的蛋白质微阵列分析
目的 检测骨髓基质细胞条件培养液(N-CM)中诱导神经干细胞(NSCs)向神经元方向分化的细胞因子,探讨骨髓基质细胞(BMSCs)调节NSCs分化的机制. 方法 将收集到的N-CM混匀后经超滤浓缩分为大于5kD和小于5kD两部分,用这两部分培养液分别培养NSCs,确定其中能促进NSCs分化为高比例神经元的部分并进行大鼠蛋白质微阵列检测. 结果 N-CM分子量大于5kD的部分可以促进NSCs分化为高比例神经元,并通过蛋白质微阵列检测,与单纯骨髓基质培养液相比,有7种细胞因子的表达量卜调了1.5倍,分别是CINC-3、CNTF、IFN-γ、IL-1α、MCP-1、TIMP-1和VEGF. 结论 BMSCs分泌的可溶性分子对NSCs分化为神经元有促进作用,其中某些分子大于5KD的细胞因子可能存这一调节作用中发挥效应.
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金标记银增强方法检测HIV抗体的蛋白质微阵列
目的:采用金标记银增强技术制备检测抗HIV病毒P24、gp41、gp36、gp120蛋白抗体的蛋白质微阵列.方法:将上述抗原片段固定在醛基化玻片上,制成了能够检测多种抗体的蛋白质微阵列,同时研究了金标记银增强技术用于蛋白质微阵列检测的方法学基础.结果:采用金银染色方法的蛋白质微阵列能够准确而灵敏地检测抗HIV不同抗原的抗体.该方法被引入应用到蛋白质微阵列检测中,可以通过光学显微镜或凭肉眼观察定性结果,仅使用普通的CCD数字照像机或CCD扫描仪就可以对信号进行采集.结论:与传统的荧光标记方法相比,金标记银增强方法的灵敏度相当,而且成本低、信号稳定、操作简便,将是前者的一种通用替代方法.
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蛋白质组学在自身免疫性疾病中的应用研究进展
自身免疫性疾病(autoimmune diseases,AIDs)是一类以免疫应答或自身免疫耐受异常为特征,累及多器官、组织的系统性疾病,发病机制尚不清楚,诊断主要依靠临床表现结合自身抗体的检测.蛋白质组学是分析蛋白质表达、功能及其在细胞、组织或生物体中相互作用的全面高通量技术,常用的方法包括二维凝胶电泳法、质谱法及蛋白质微阵列等.蛋白质组学主要在蛋白质水平上研究临床疾病的发生和发展,在AIDs中可用于鉴定新的自身抗原/抗体、筛选诊断相关候选蛋白、寻找疾病活动性相关蛋白、发现有效治疗靶点及评估临床疗效.
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蛋白质组学技术在癌症相关研究中的应用
寻找理想的表型生物标志物,阐明疾病发生、发展过程中起关键作用的蛋白质分子以用于癌症的早期检测诊断及预后评估一直是癌症研究领域的热点和难点.随着人类基因组测序的完成,癌症研究的重点从基因组学转移到蛋白质组学研究中,癌症研究中的差异蛋白质组学技术也飞快发展,极大推动了与癌症相关的差异蛋白质组学研究,本文综述了近年来蛋白质组学技术在与癌症相关研究中的一些应用.
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椭偏光学生物传感器及生物医学应用
椭偏光学生物传感器是识别和检测蛋白质的一种新型的高通量、快速生物分子分析技术.它可以实现无标记多元生物分子自动化检测、静态或动态测量及定性和定量测量等,已应用于生物医学与临床检测等方面,如肿瘤标志蛋白检测、乙肝五项同时检测、蛋白质竞争吸附以及多元蛋白质相互作用动态测量等,显示出了广阔的应用前景.
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蛋白质微阵列载体的选择及表面修饰方法
蛋白质微阵列又称蛋白质芯片,是近年来兴起的一项蛋白质组学研究技术,广泛应用于蛋白质组学研究、医学基础与临床诊断等,相比基因芯片上的DNA,蛋白质更为复杂和不稳定,固定在微阵列表面的蛋白质容易变性失活,因此研究和制作蛋白质微阵列的关键步骤之一就是要寻找合适的载体材料及其相应的表面修饰技术,以保证能够固定足够量蛋白质的同时保持蛋白质的活性.就近年来用于蛋白质微阵列的载体及其表面修饰方法进行综述.
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蛋白质芯片及其应用
人类基因组计划的实施和大量珍贵的功能基因组数据的获得,使得蛋白质研究显得越发重要.蛋白质芯片技术的出现为我们提供了一种较传统的凝胶电泳更为方便和快速的研究方法.
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蛋白质组学的研究方法
近年来,蛋白质组学的研究在生物医学领域正逐步深入,研究方法也正逐步完善.本文综述了蛋白质组学的几种研究方法,指出了各种方法的优点及局限性,并且对蛋白质组学的研究方法和前景进行了展望.
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制备蛋白质微阵列的玻璃表面修饰方法比较
目的探讨用于制备蛋白质微阵列的5种不同修饰方法的玻片对蛋白质的固定能力,通过对荧光信号强度的大小以及蛋白芯片检测的灵敏度的比较确定一种蛋白质固定效果好、信噪比高的玻片.方法将系列稀释的人IgG分别点在5种不同修饰方法[包括氨基、多聚赖氨酸、3-氨丙基三乙氧基硅烷(APES)、醛基-磷酸盐缓冲液、醛基-H20]修饰的玻片上制备蛋白质微阵列,比较不同玻片修饰方法荧光信号强度的大小以及蛋白芯片检测的灵敏度.结果5种玻片中APES修饰的玻片蛋白质固定效果好,信噪比高.结论APES修饰的玻片比较适合制备蛋白质微阵列.
关键词： 蛋白质微阵列 氨基修饰 醛基修饰 多聚赖氨酸修饰 3-氨丙基三乙氧基硅烷修饰 -
蛋白质芯片研究进展及应用
蛋白质芯片为高通量并行分析和检测蛋白质提供了强有力的工具.本文较系统地阐述了蛋白质芯片种类、制备、生物样品处理、探针标记和检测方法;同时也讨论了蛋白质芯片技术的应用、存在问题以及发展前景.
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蛋白质芯片及其应用
人类基因组计划的实施和大量珍贵的功能基因组数据的获得,使得蛋白质的研究显得越发重要.蛋白质芯片技术的出现为我们提供了一种较传统的凝胶电泳技术更为方便和快速的研究方法.
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基于磁珠的ABO血型蛋白质芯片的构建及初步应用分析
目的：构建一种以磁珠为标记物的，用于血型检测的可视化蛋白质芯片。方法用人免疫球蛋白G （IgG）及磁珠标记的抗人IgG进行琼脂糖浓度、点样浓度、温度和固定时间等实验条件的摸索。根据优化的条件，经过铺片、点样、固定、封闭等程序构建ABO血型检测蛋白质微阵列，加入血液样品进行反应，后用磁珠标记的抗体进行检测。结果通过条件的优化发现，在1．0％的琼脂糖基片表面，以100μg/m L的蛋白质稀释液点样，之后在24℃固定8 h ，能够得到更优的信号强度。检测不同稀释度的抗原抗体，正定型效价可达到1∶8192，反定型可达到1∶4096。检测14例临床样品，结果样点清晰、肉眼可见，且结果判定与试管法一致性达100％。结论成功构建了基于磁珠的血型检测可视化蛋白质微阵列。
