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施万细胞和L-NNA对脊髓半横断后脑干红核神经元存活的影响
目的探讨移植施万细胞(SCs)和应用一氧化氮合酶抑制剂L-硝基精氨酸(L-NNA)能否促进脑干红核受损伤的神经元存活.方法 20只成年SD雌性大鼠分为:对照组、SCs组、L-NNA组和SCs+L-NNA组.在胸11脊髓段半横断后立即在损伤处植入SCs,术后腹腔注射L-NNA.结果脊髓半横断后30 d,对照组和L-NNA组大鼠受损伤侧红核的神经元密度明显降低,但两组间无明显差异;两组受损伤侧红核神经元的NOS表达阴性.SCs组和SCs+L-NNA组大鼠受损伤侧红核的神经元密度明显增加,两组间无显著差异;两组受损伤侧红核神经元NOS表达也呈阴性.结论移植的SCs能够促进受损伤的红核神经元存活.NOS可能不参与影响受损伤红核神经元的存活过程,因而L-NNA对受损伤红核神经元的存活没有作用.
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NO介质在大鼠红藻氨酸诱导癫痫发作中的作用
目的:进一步探讨脑内一氧化氮(NO)介质(NO或NO衍生物)在复杂部分性及全身强直阵挛性癫痫发作中的作用.方法:采用红藻氨酸(KA)诱导大鼠癫痫发作,以NO合酶抑制剂L-硝基精氨酸(L-NNA)或NO前体L-精氨酸(L-Arg)予以预处理,观察其癫痫发作行为及海马结构内NO含量(NO2-/NO3-)的变化.结果:给予大鼠惊厥剂量KA(10 mg/kg),15 min时出现湿狗样抖动(WDS),1～3 h出现全身痉挛;经L-NNA(50mg/kg)或L-Arg(40mg/kg)预处理的大鼠,注射相同剂量的KA后,其癫痫行为发生明显变化,L-NNA预处理的大鼠癫痫发作行为明显加重,表现为全身痉挛的潜伏期缩短、时间延长、死亡率提高;L-Arg预处理的大鼠癫痫发作行为减弱,WDS和全身痉挛的潜伏期均延长,发作程度减轻、时间缩短,观察时间内无一例死亡.KA给药后30 min海马结构内的NO2-/NO3-含量迅速增多,7 d时仍持续增高;与NS预处理组相比,经L-Arg预处理的动物,KA给药后3 h及3 d,其NO2-/NO-3浓度升高明显.结论:兴奋诱导性癫痫发作过程中内源性No介质的变化可能具有重要的抗发作作用.
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L-硝基精氨酸对大鼠急性脑缺血损伤后炎症因子及细胞凋亡的影响
目的:观察L-硝基精氨酸(L-NA)对局灶性脑缺血损伤后炎症因子和神经细胞凋亡的影响,探讨L-NA保护脑缺血损伤组织的作用机制.方法:健康雄性SD大鼠,体重250-280 g,随机分为3组(n=10):假手术组(SH组)、缺血组(IS组)、L-NA治疗组(L-NA组).IS、L-NA组采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血损伤模型.L-NA组每次腹腔注射L-NA 20 mg/kg,每日2次,连续3 d.IS组给予等量的生理盐水.将大鼠断头取脑,采用免疫组化法检测脑组织中TNF-α表达变化,放免法检测IL-1β水平变化,流式细胞仪测定脑组织神经元凋亡率、Bcl-2蛋白、Bax蛋白表达及Bcl-2蛋白与Bax蛋白比值(Bcl-2/Bax).结果:与SH组比较,IS组脑缺血灶范围内TNF-α表达明显增强,IL-1β水平显著升高,神经凋亡率及Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax降低;与IS组比较,L-NA组脑缺血灶范围内TNF-α表达及IL-1β水平显著降低,神经凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax升高,Bax蛋白表达降低.结论:L-NA通过抑制TNF-α和IL-1β的升高,增加Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达,调节Bcl-2/Bax平衡,对脑缺血大鼠脑神经元产生一定程度的保护作用.
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L-硝基精氨酸对大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的影响
目的观察非选择性一氧化氮合酶抑制剂L-硝基精氨酸(L-NA)对大鼠局灶性脑缺血诱导的神经元凋亡的影响,探讨L-NA对脑缺血的保护作用及其机制.方法健康雄性SD大鼠,体重250～300 g,随机分为假手术组(SH组)、缺血组(IS组)、L-NA治疗组(L-NA组).IS和L-NA组按缺血后时间分为三个亚组:2 h、6 h、12 h.每组6只大鼠.L-NA组每次按20mg/kg,ip给药,每日2次,连续3 d.IS组给等容量的生理盐水.插线法制备大鼠大脑中动脉阻断模型.采用流式细胞仪(FCM)检测脑组织细胞凋亡率,Western blot法和免疫组化法检测Caspase-3蛋白的表达,FCM和免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果大鼠脑缺血后,细胞凋亡率、Caspase-3和Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达差异无显著性,Bcl-2/Bax降低,缺血12 h治疗3 d时,L-NA组中细胞凋亡率、Caspase-3和Bax蛋白表达显著低于相应的IS组,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax高于IS组,缺血2、6 h治疗3 d L-NA组中细胞凋亡率、Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达和Bcl-2/Bax与IS组比,差异无显著性.结论缺血后期应用L-NA对脑缺血有治疗作用,可能与降低Caspase-3、增加Bcl-2表达、降低Bax蛋白表达、调节Bcl-2/Bax蛋白平衡有关.
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L-硝基精氨酸对红藻氨酸致痫大鼠胶质原纤维酸性蛋白免疫反应性的影响
目的观察一氧化氮(NO)在癫痫发作早期的抗发作效应及可能的细胞学机制.方法应用一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-硝基精氨酸(L-NNA)对红藻氨酸(KA)致痫大鼠的发作进行干预,同时用免疫组织化学染色方法观察海马结构胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果 KA致痫3 h大鼠海马结构GFAP免疫反应性发生区域性增强改变,增强区主要为CA3-CA1锥体细胞层(p)和齿状回门区(h);L-NNA预处理组上述区域性增强改变更明显,同时致痫大鼠湿狗样摇动(WDS)的潜伏期缩短、Baran评分增加,症状加重.结论内源性NO对KA致痫大鼠GFAP的表达有影响,这可能是NO在KA致痫早期具有抗发作效应的机制之一.
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L-硝基精氨酸对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用及其机制
目的:研究非选择性一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-硝基精氨酸(L-NA)对局灶性脑缺血大鼠脑组织的保护作用及其机制.方法:线栓法复制大鼠大脑中动脉脑缺血模型;采用RT-PCR法检测大鼠缺血0,2,6,12,24h脑组织中[内皮型NOS(eNOS)、神经型NOS(nNOS)及诱导型NOS(iNOS)]基因表达的变化;TTC染色法测定大鼠脑梗死体积,HPLC法测定纹状体、海马、皮层中氨基酸含量.结果:正常对照组可见eNOS和nNOS表达,eNOS于脑缺血后2h达到高峰,nNOS于6h达到高峰;正常对照组未见iNOS表达,但在脑缺血后开始表达,缺血后12h达到高峰;缺血后12h给予L-NA治疗3d L-NA组中梗死体积/全脑体积(Ⅳ%)显著低于相应的缺血组;缺血组天门冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、GABA的含量明显高于假手术组,缺血12h治疗3d时,L-NA组中纹状体、海马、皮层中天门冬氨酸、谷氨酸的含量显著低于缺血组,GABA的含量显著高于缺血组,海马中甘氨酸含量显著高于缺血组.结论:缺血后期应用L-NA对脑缺血有治疗作用,可能与兴奋性氨基酸合成、释放相对减少,抑制性氨基酸合成、释放相对增加有关.
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L-硝基精氨酸对局灶性脑缺血大鼠脑组织氨基酸含量的影响
目的:观察一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-硝基精氨酸(L-NA)对脑缺血大鼠纹状体、海马、皮质中天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸(GABA)含量的影响,探讨L-NA对大鼠脑缺血组织的保护作用及其作用机制. 方法:采用线栓法复制大鼠大脑中动脉梗塞(MCAO)模型,缺血后给予L-NA治疗.相应时间断头取脑,然后测定脑梗死体积、脑组织中氨基酸的含量. 结果:脑梗死体积L-NA组较缺血组明显缩小;与假手术组比较,缺血组大鼠纹状体、海马、皮质中天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、GABA含量显著增加,给予L-NA治疗后,缺血后12h治疗组中天冬氨酸、谷氨酸的含量明显降低,甘氨酸、GABA含量明显升高. 结论:L-NA降低脑组织中兴奋性氨基酸的含量及升高抑制性氨基酸的含量可能是保护脑缺血的重要机制.
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L-硝基精氨酸对大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的影响
目的观察非选择性一氧化氮合酶抑制剂L-硝基精氨酸(L-NA)对大鼠局灶性脑缺血诱导的神经元凋亡的影响,探讨L-NA对脑缺血的保护作用及其机制.方法健康♂SD大鼠,体重250～300 g,随机分为假手术组(SH组)、缺血组(IS组)、L-NA治疗组(L-NA组).IS和L-NA组按缺血后时间分为3个亚组:2 、6、12 h.每组6只大鼠.L-NA组每次按20 mg·kg-1,ip给药,每日2次,连续3 d.IS组给等容量的生理盐水.插线法制备大鼠大脑中动脉阻断模型.采用流式细胞仪(FCM)检测脑组织细胞凋亡率、Western blot法和免疫组化法检测caspase-3蛋白的表达、FCM和免疫组化法检测bcl-2和Bax蛋白的表达.结果大鼠脑缺血后,细胞凋亡率、caspase-3和Bax蛋白表达明显升高,bcl-2蛋白表达无差异,bcl-2/Bax降低,缺血12 h治疗3 d时,L-NA组中细胞凋亡率、caspase-3和Bax蛋白表达低于相应的IS组,bcl-2蛋白表达、bcl-2/Bax高于IS组,缺血2,6 h治疗3 d L-NA组中细胞凋亡率、caspase-3、bcl-2、Bax蛋白表达和bcl-2 /Bax与IS组比差异无显著.结论缺血后期应用L-NA对脑缺血有治疗作用,与降低caspase-3、增加bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、调节bcl-2蛋白/Bax蛋白平衡有关.
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L-精氨酸、L-硝基精氨酸对红藻氨酸诱导大鼠癫痫及其海马结构中iNOS mRNA表达的影响
目的观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在红藻氨酸(KA)癫痫大鼠海马内的表达及L-精氨酸(L-Arg)和L-硝基精氨酸(L-NNA)慢性干预的影响.方法采用惊厥剂量的KA(10 mg*kg-1)诱导大鼠癫痫发作,以NOS抑制剂L-NNA(50 mg*kg-1)和NO前体L-Arg(40 mg*kg-1)进行干预,对大鼠的癫痫发作行为及KA后不同时间点的海马内iNOS mRNA,通过RT-PCR观察其表达.结果 KA可使动物发生时间相关性癫痫发作,L-NNA预处理后使KA诱导的癫痫发作明显加重,而L-Arg预处理后使KA诱导的癫痫发作减弱.iNOS mRNA在KA处理后3 h开始有微弱的表达,且随着时间的延长逐渐增加,24 h达到高水平,2 d及3 d时未见表达,但7 d时又出现高表达;经L-NNA预处理的动物,KA后1 h其海马结构中未出现iNOS mRNA,但L-Arg预处理后再给予KA后1 h,可见微弱的iNOS mRNA表达.结论红藻氨酸给药后一定时间,癫痫大鼠海马结构中可出现iNOS mRNA表达,L-Arg慢性干预也有一定影响.
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NO对红藻氨酸癫痫发作和IL-6表达的影响
目的探讨脑内一氧化氮(NO)介质对癫痫发作及白细胞介素6(IL-6)表达的影响.方法采用红藻氨酸(KA)诱导大鼠癫痫发作,以一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-硝基精氨酸(L-NNA)和NO前体L-精氨酸(L-Arg)进行干预,从行为学评估及形态学的角度,对KA癫痫发作和IL-6的相关变化做了观察.结果一次惊厥剂量的KA(10 mg*kg-1)可使动物发生明显的时间相关性癫痫发作,并伴随着海马结构、梨状区及大脑皮层等相关脑区IL-6免疫反应(IL-6 ir)的快速升高与增强.而经L-NNA(50 mg*kg-1)或与其等摩尔量的L-Arg(40 mg*kg-1)预处理后,其癫痫行为发生了明显变化.L-NNA促进和加重了癫痫发作,KA给药后3 h许多动物死亡,而L-Arg可使癫痫发作行为减缓.与行为干预相对应,L-NNA对海马结构等相关脑区内的IL-6 ir有明显的上调作用,L-Arg则显示出相反的效应.结论内源性NO介质对KA癫痫发作具有抑制作用,对IL-6的快速表达具有下调作用,但这种下调作用与内源性NO介质抗癫痫发作的稳态关系还需进一步探讨.
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L-硝基精氨酸在大鼠经脊髓作用预防局麻药坐骨神经阻滞的耐药反应
目的:阐明一氧化氮在脊髓阶段预防局麻药坐骨神经阻滞耐药反应的作用。方法:大鼠随机分为3组。第一组NS腹腔内和蛛网膜下腔注射。第二组NS腹腔内和L-NAME蛛网膜下腔注射。第三组NS蛛网膜下腔和L-NAME腹腔内注射。L-NAME腹腔内或蛛网膜下腔注射的剂量是1,10,100,1 000,10 000nmoL(n=9/组)。随后用3%二氯普鲁卡因0.3mL依次3次阻滞坐骨神经，记录每次热痛觉、本体感觉和运动功能阻滞持续时间。结果:L-硝基精氨酸预防局麻药坐骨神经阻滞耐药反应的蛛网膜下腔的50％有效剂量显著地低于腹腔内注射的50％有效剂量，比率至少超过20倍。结论:L-硝基精氨酸通过脊髓作用预防局麻药耐药反应。
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一氧化氮的脊髓作用对局麻药耐药反应的影响
目的探讨一氧化氮 (NO)在脊髓的作用与局麻药外围神经阻滞耐药的关系.方法①鼠随机分为 3组,组 1腹腔和蛛网膜下腔注射生理盐水 (NS),组 2接受NS腹腔和5个剂量之一的L-NAME蛛网膜下腔给药,组 3接受5个剂量之一的L-NAME腹腔和NS蛛网膜下腔注射.L-NAME剂量是 1, 10, 100, 1 000, 10 000 nmol (n=9);②蛛网膜下腔注射NS,L-NAME或 D-NMAE 1 000 nmol (n=9).③蛛网膜下腔注射NS,精氨酸 25 μmol 跟随L-NAME 1 000 nmol或NS (n=9).随后用3%氯普鲁卡因0.3 ml依次3次阻滞鼠坐骨神经,用热板、触觉复位、单足跳和肌力测试记录阻滞时间.结果 L-NAME蛛网膜下腔和腹腔给药阻止局麻药耐药的作用与剂量有关,蛛网膜下腔ED50明显低于腹腔ED50比率超过20倍.D-NAME对局麻药耐药无显著影响(P＞0.05),精氨酸显著增加局麻药耐药 (P＜0.05)并抑制L-NAME抗耐药的作用.结论该实验表明L-NAME通过NO脊髓受体作用抑制局麻药耐药反应的发生.
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L-精氨酸对创伤性面瘫大鼠面神经NOS表达的影响
目的:研究一氧化氮前体L-精氨酸(L-Arg)与组成型一氧化氮合酶(cNOS)抑制剂L-硝基精氨酸对创伤性面瘫大鼠外周面神经及周围组织一氧化氮合酶(NOS)表达的影响.方法:通过大鼠面瘫前后腹膜内给予L-精氨酸与L-硝基精氨酸,在伤后各个时间点上切取损伤面神经和软组织,并采用免疫组织化学ABC法对面神经和肌肉软组织内NOS表达的变化进行研究.结果:L-精氨酸组面神经损伤后有cNOS表达,2组肌肉伤后呈现一定程度的eNOS、iNOS(诱导型一氧化氮合酶)免疫反应性,且反应相似.结论:L-精氨酸组面神经损伤后有cNOS表达,可能促进神经再生;而iNOS表达则阻碍神经再生.
