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小鼠endostatin基因的克隆、表达及表达产物的活性鉴定
目的克隆并表达小鼠endostatin基因,并初步检测其血管生长抑制功能,为胶质瘤的基因治疗探索新的途径. 方法从小鼠肝组织用RT-PCR法扩增 endostatin基因,重组入pUC19质粒, 经测序证实无误后,重组入表达载体pDH,经温度诱导表达,并用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验检测表达产物活性. 结果从小鼠肝组织中成功扩增到endostatin基因,测序与报道序列一致. 重组进pDH后经温度诱导表达,在S DS-PAGE电泳上得到一条新的蛋白表达带,分子质量为20 ku. 纯化后的蛋白能明显抑制CAM 的血管生长. 结论成功构建了小鼠endostatin cDNA的重组克隆pDH-Endo,并在大肠杆菌中获得高效表达. 在CAM 实验中表明纯化后的蛋白具有明显血管抑制作用. 为利用endostatin进行脑胶质瘤等实体瘤的基因治疗奠定了实验基础 .
关键词： 内皮抑素 反转录-聚合酶链式反应 基因克隆 基因表达 鸡胚绒毛尿囊膜实验 -
PDCD5基因在初诊Graves'病患者PBMCs中表达情况的初步研究
目的 探讨促凋亡基因PDCD5 mRNA在初诊Graves'病(GD)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达.方法 半定量RT-PCR法检测53例初诊GD患者外周血单个核细胞PDCD5 mRNA表达的阳性率和表达水平.结果 35例PDCD5 mRNA在GD患者PBMCs中表达呈阳性,阳性率为66.1%,较正常对照者(55.6%)升高;其表达水平(1.01±0.13)显著高于正常对照(0.52±0.13,P＜0.05),且GD患者高T3水平组PDCD5 mRNA的表达显著高于低T3水平组(P＜0.05).结论 PDCD5 mRNA 在GD患者PBMC表达升高,可能与GD淋巴细胞凋亡异常有关.
关键词： PDCD5 Graves'病 凋亡 外周血单个核细胞 反转录-聚合酶链式反应 -
CD44 mRNA在伴有静脉侵袭的结直肠癌中的表达及其与肝转移的关系
目的:研究伴有静脉侵袭的结直肠癌组织中 CD44 mRNA的表达及其与肝转移的关系.方法:采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测31例伴有静脉侵袭的结直肠癌组织中CD44 mRNA的表达状况.结果:CD44 mRNA在伴有静脉侵袭的结直肠癌组织中阳性表达率为64.5%.同时伴有肝转移者,CD44mRNA的强阳性表达率为70.6%,表达强度明显高于无肝转移者(28.6%),P<0.01.结论:结直肠癌组织中CD44mRNA具有较高的阳性表达率,且表达强度与癌细胞的肝转移密切相关.
关键词： 结直肠癌 CD44 肝转移 反转录-聚合酶链式反应
