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ESRP1剪接变异体的克隆及其对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响
目的 克隆ESRP1剪接变异体并构建其慢病毒表达载体,研究其对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖的影响.方法 以OVCAR3细胞的cDNA为模板,PCR扩增ESRP1剪接变异体,将其连接到带有Myc标签的pCMV-Myc真核表达载体;再以该真核表达载体为模板,将含有Myc标签的ESRP1剪接变异体克隆到慢病毒表达载体pLV-tTR/KRAB-Red上,从而构建带有Myc标签的ESRP1剪接变异体慢病毒表达载体;用该慢病毒表达载体转染293T细胞,包装慢病毒;用该慢病毒感染MDA-MB-231细胞,用MTT法检测该细胞增殖,用Western blot检测该细胞中PARP蛋白的表达.结果 成功构建带有Myc标签的ESRP1剪接变异体慢病毒表达载体,并包装出慢病毒;用该慢病毒感染MDA-MB-231细胞后,与空载体对照组比较,ESRP1过表达能明显抑制MDA-MB-231细胞增殖(P＜0.05);ESRP1过表达能诱导PARP蛋白的剪切.结论 成功构建带有Myc标签的ESRP1剪接变异体的慢病毒表达载体;ESRP1过表达能抑制MDA-MB-231细胞增殖,这可能与细胞死亡有关.
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miR-23a调控ESRP1干预直肠癌细胞增殖和凋亡
目的 分析微小RNA-23a(microRNAs-23a,miR-23a)在直肠癌组织及细胞系中的相对表达水平,以及miR-23a对直肠癌细胞增殖和凋亡的作用,并分析其可能作用机制.方法 采用qRT-PCR检测miR-23a在36例直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平;利用qRT-PCR检测miR-23a在直肠癌SW480细胞及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达;合成miR-23a抑制剂(inhibitor) RNA片段和抑制剂阴性对照RNA片段(inhibitor negative control,inhibitor NC),并将其分别转染至SW480细胞后,通过CCK-8法检测miR-23a inhibitor转染SW480细胞后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测转染后细胞凋亡率;Western blot法检测上皮剪接调节蛋白1(epithelial splicing regulatory protein 1,ESRPl)蛋白在SW480细胞中的表达水平;构建野生型pGL3-ESRP1-3'UTR(wt-pGL3-ESRP1-3'UTR)或突变型pGL3-ESRP1-3'UTR(mut-pGL3-ESRP1-3'UTR)质粒,HEK293和SW480细胞经上述质粒分别与miR-23a inhibitor或inhibitor NC共转染后测定双荧光素酶活性.结果 与癌旁正常组织相比较,miR-23a在直肠癌组织中的相对表达水平明显上调,差异有统计学意义(P=0.000);与NCM460细胞相比较,miR-23a在SW480细胞中的表达量显著上调,差异有统计学意义(P=0.000);SW480细胞转染miR-23a inhibitor后,细胞增殖较inhibitor NC组下降35.54％±5.27％,两组结果差异有统计学意义(P=0.000);转染miR-23a inhibitor后SW480细胞早期凋亡率明显高于inhibitor NC组(P=0.000);荧光素酶报告基因结果表明ESRP1是miR-23a的直接靶基因;SW480细胞转染in-hibitor NC后对ESRP1蛋白表达无明显影响,而转染miR-23a inhibitor至SW480细胞后ESRP1蛋白表达水平明显升高.结论 miR-23a在直肠癌组织和细胞系中的表达均显著升高,miR-23a可通过下游靶基因ESRP1从而调控直肠癌细胞增殖和凋亡.
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ESRP1在人头颈部鳞状细胞癌中的表达及其与ZEB1的关系
目的:探讨上皮剪切调控蛋白1(epithelial splicing regulatory protein 1,ESRP1)和在人头颈部鳞状细胞癌(Head and Neck Squamous Cell Carcinoma,HNSCC)发生、 发展中的作用及其与锌指E盒结合蛋白1(zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)的关系.方法:采用免疫组化S-P染色法检测ESRP1和ZEB1在32例HNSCC组织及其对应的癌旁组织中的表达情况.结果:(1)HNSCC组织中ESRP1表达较癌旁组织低(P<0.05);(2)在HNSCC组织中ESRP1的表达与肿瘤分化及复发/转移密切相关(P<0.05);(3)HNSCC组织中ESRP1高表达者ZEB1表达较低(P<0.05).结论:(1)ESRP1表达减少或缺失对HNSCC的发生发展可能具有促进作用,与肿瘤分化程度也可能密切相关;(2)ESRP1表达下调与ZEB1高表达密切相关.
