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葡萄糖调节蛋白75在缺糖损伤PC12细胞中的表达
目的 观察葡萄糖调节蛋白75(GRP75)在缺糖条件下在PC12细胞中的表达.方法 体外模拟能量代谢障碍建立细胞缺糖模型,MTT检测PC12细胞活率;LDH测定细胞膜损伤程度;流式细胞仪PI单染色法和AnnexinV/PI双染色法检测细胞的损伤形式;RT-PCR和Western blot分别检测GRP75基因在RNA和蛋白水平上的表达.结果 随着缺糖时间的延长细胞活力逐渐降低,LDH释放率明显增加,缺糖死亡的细胞有部分凋亡细胞,并出现明显的凋亡峰,GRP75 mRNA在24h内表达上调,同时蛋白表达上调.结论 GRP75在缺糖损伤PC12细胞中有一定的保护作用.
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丹酚酸B对PC12细胞缺糖损伤的保护作用及机制
目的 观察丹酚酸B(SAB)对PC12细胞缺糖损伤的作用并探讨其作用的机制.方法 以PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)的无糖培养建立细胞缺糖损伤模型,MTT法检测细胞的存活率;应用流式细胞仪检测亚二倍体细胞的比率及线粒体跨膜电位的改变;应用免疫细胞化学、RT-PCR法研究细胞内应激蛋白grp75的表达变化,激光共聚焦显微镜(Confocal)观察SAB作用下Ca2+的变化.结果 无糖培养24 h细胞存活率降低,凋亡率高达26.10%,大部分细胞线粒体跨膜电位去极化.在无糖培养液中加入丹酚酸B成分后,细胞无糖损伤有明显的改善,存活率上升,凋亡率显著下降,线粒体跨膜电位去极化状态明显改善.免疫细胞化学法和RT-PCR结果均显示丹酚酸对grp75表达没有影响;但经SAB作用后,细胞内Ca2+浓度明显降低.结论 SAB对细胞缺糖损伤有明显的保护作用,其作用机制与抑制钙离子内流有关.
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谷氨酰胺对细胞缺糖损伤的保护作用
目的观察谷氨酰胺(glutamine,Gln)对细胞缺糖(glucose desprivation,GD)损伤的保护作用,并探讨可能的作用机制.方法在以无糖培养大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞建立细胞缺糖损伤模型的基础上,首先以噻唑蓝比色(MTT)法、流式细胞法、细胞线粒体跨膜电位检测等方法观察Gln对缺糖损伤细胞模型的作用;再以大鼠大脑中动脉线栓法建立动物脑缺血模型,观察Gln对动物缺血性损伤的保护作用;同时用免疫细胞化学法、Western blot印迹法检测细胞中应激基因葡萄糖调节蛋白75(grp75)的表达变化.结果 Gln能使离体细胞在缺糖应激下存活率增加、凋亡率降低,线粒体跨膜电位稳定;动物实验显示Gln能减轻动物因缺血造成的脑损伤;免疫细胞化学法、Western blot印迹法检测结果表明Gln可以上调细胞中grp75的表达.结论 Gln对细胞缺糖损伤和动物缺血性脑损伤具有一定的保护作用,这种保护作用可能与上调细胞中的应激基因grp75的表达有关.
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ER-α36与Akt在PC12细胞缺糖应激反应中的关系
ER-α36是一种分子量为36 kDa的雌激素受体(estrogen receptor,ER)新亚型,其主要通过介导膜雌激素信号通路参与多种细胞生理、病理等过程.本文利用RNA干扰技术敲低大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株PC12的ER-α36基因,研究ER-αt36与Akt在神经细胞缺糖损伤中的关系.采用MTT、Western blot和Annexin V/PI双染等方法,观察了ER-α36在细胞缺糖应激反应中的作用.结果显示:(1)随着缺糖损伤时间的增加,PC12细胞的存活率逐渐降低,6h后其细胞存活率与对照组相比具有极显著性差异(P＜0.01),凋亡率升高,6h后具有极显著性差异(P＜0.01)；葡萄糖转运蛋白Glut-4表达水平显著降低(P＜0.01)；(2)缺糖损伤3h时,ER-α36明显减少(P＜0.01),但随后逐渐增加；缺糖可引起抗凋亡蛋白Akt磷酸化水平先升高后降低(P＜0.05)；加入PI3K抑制剂LY294002,ER-α36表达降低,Akt的激活被抑制；(3)敲低ER-α36后缺糖处理,细胞凋亡率高于野生型,具有极显著性差异(P＜0.01)；敲低ER-α36的细胞缺糖导致的Akt激活减弱,Caspase-3表达增多.以上结果表明,在PC12细胞的缺糖应激反应中,Akt激活情况可能与ER-α36相关,两者共同参与缺糖损伤应激调控.
关键词： ER-α36 缺糖损伤 Akt抗凋亡信号通路 PC12细胞 -
缺糖损伤对PC12细胞的效应及对葡萄糖调节蛋白75的表达影响
目的:探讨缺糖损伤对PC12细胞的效应及对葡萄糖调节蛋白75(grp75)的表达影响.方法:通过形态学观察、MTT法及流式细胞术检测缺糖损伤对PC12细胞活力的影响,通过RT-PCR法检测缺糖损伤对grp75在PC12细胞中表达的影响.结果:PC12细胞在无糖培养条件下,细胞活力逐渐下降,48小时后,大部分细胞死亡,部分细胞为凋亡.而grp75的表达随着无糖培养时间的增加而上调.结论:缺糖损伤导致PC12细胞活力下降,并引起grp75的上调表达.
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PC12细胞缺糖损伤的分子生物学特征
目的在体外模拟能量代谢障碍研究PC12细胞缺糖损伤的分子生物学特征.方法电镜观测形态改变,MTT检测功能异常,RT-PCR测定Bcl-2在RNA水平上的表达.结果电镜观察到细胞有凋亡现象;MTT显示细胞活力降低;RT-PCR结果表明Bcl-2在6～16 h表达上调.结论缺糖损伤的PC12细胞既有形态的变化也有功能上的变化,并同时伴随着凋亡和坏死两种死亡现象.
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脑溢安颗粒剂对缺糖损伤后海马神经细胞凋亡的影响
根据sadrozaden报道的方法复制胎鼠海马神经细胞原代培养缺糖损伤模型,采用细胞形态学、DNA裂解率、流式细胞仪方法,观察缺糖损伤后,原代培养的胎鼠海马CA1神经细胞的形态结构,DNA完整性、神经细胞发生凋亡的数量;结果,缺糖损伤后,培养神经细胞DNA裂解率随时间延长而增加,12 h达到83%,脑溢安颗粒剂(NYA)对缺糖损伤后神经细胞DNA裂解率的抑制作用大于模型组,差异具有统计学意义(P＜0.05);流式细胞仪器检测,在12 h时间点,NYA组神经细胞凋亡数量比模型组减少37%,差异具有统计学意义(P＜0.05).本研究提示,NYA具有抑制培养神经细胞DNA断裂,减少神经细胞凋亡的作用.
