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油酸诱导SW872前脂肪细胞分化及分化过程中促酰化蛋白的分泌
目的探讨油酸对SW872前脂肪细胞的诱导分化作用及SW872细胞分化过程中促酰化蛋白的分泌.方法体外培养SW872细胞,0.6 mmol/L油酸作为诱导分化剂刺激SW872前脂肪细胞,油红O染色观察细胞形态的变化及脂滴的聚集,化学比色法测定甘油三酯的总量,ELISA方法测定培养上清中促酰化蛋白的含量.结果SW872细胞分化之前呈成纤维细胞样,胞内无脂滴,甘油三酯的含量较低;加入0.6 mmol/L油酸诱导分化刺激72 h时,SW872细胞已经完全分化,胞浆中脂滴明显增多,油红O染色可见胞浆中丰富的脂肪染色,甘油三酯的含量是诱导分化前的14倍(P＜0.01).诱导分化之前,SW872细胞分泌ASP的量非常低,几乎不能检测出;诱导分化72 h,ASP的含量增加到1.12 ng/mg细胞总蛋白质.结论油酸能诱导SW872前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞;ASP的分泌与脂肪细胞的分化程度密切相关.
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姜黄素对SW872细胞增殖及分化的影响
目的 探讨姜黄素对SW872前脂肪细胞增殖、分化的影响.方法 体外培养SW872脂肪细胞,采用0.6 mmol/L油酸诱导SW872前脂肪细胞分化,MTT法检测不同浓度姜黄素对SW872前脂肪细胞增殖活力的影响;油红O染色观察前脂肪细胞内脂肪的聚积情况.结果 低浓度姜黄素对SW872前脂肪细胞没有明显作用;当姜黄素浓度＞20 μmol/L时,细胞生长速度减缓,细胞增殖受抑制.同时,姜黄素处理细胞24 h,可抑制前脂肪细胞的分化,呈剂量-效应关系.结论 姜黄素对SW872前脂肪细胞具有抑制生长和分化的功能.
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EGCG改善油酸诱导的SW872脂肪细胞胰岛素抵抗作用及机制
目的 观察植物化学物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对胰岛素抵抗SW872脂肪细胞葡萄糖转运、胰岛素敏感性及炎症因子表达作用.方法 利用油酸处理脂肪细胞诱导胰岛素抵抗模型,给予不同剂量EGCG(25、50、100 μmol/L)处理24h,利用激光共聚焦显微镜检测2-脱氧葡萄糖标记的葡萄糖摄取、Western-blot检测葡萄糖转运因子4(GLUT4)蛋白表达、实时荧光定量逆转录多聚酶联反应(RT-qPCR)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)mRNA表达,酶标记免疫吸附测定法(ELISA)检测培养液中TNF-α、IL-6、CRP蛋白含量.结果 与对照组比较,模型组脂肪细胞葡萄糖摄取和GLUT4蛋白表达明显降低(P＜0.05),TNF-α、IL-6、CRP mRNA明显升高(P＜0.01),TNF-α、IL-6、CRP蛋白分泌量[分别为(161.3±14.2)、(121.6±13.6)、(1.82±0.17)]明显升高(P＜0.01);与模型组比较,EGCG组脂肪细胞葡萄糖摄取和GLUT4蛋白表达明显增加(P＜0.05),TNF-α、IL-6、CRP mRNA明显下降(P＜0.01),低、中、高剂量EGCG组脂肪细胞TNF-α、IL-6、CRP蛋白分泌量[分别为(148.8±13.3)、(93.3±10.4)、(1.74±0.12)pg/mL,(131.4±11.3)、(85.5±14.1)、(1.53±0.15)pg/mL和(119.5±12.1)、(73.9±11.3)、(1.36±0.12)pg/mL]明显降低(P＜0.01),呈剂量效应关系.结论 EGCG可促进脂肪细胞葡萄糖摄取和增强胰岛素敏感性,进而改善胰岛素抵抗,其机制可能与降低脂肪细胞炎症因子表达有关.
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姜黄素致SW872脂肪细胞凋亡作用
目的 探讨姜黄素对SW872脂肪细胞凋亡的影响及其凋亡机制.方法 MTT法检测不同剂量姜黄素对SW872前脂肪细胞和成熟脂肪细胞生长抑制的影响;4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察姜黄素作用后成熟脂肪细胞内细胞核变化.蛋白印迹法检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)裂解产物和Bcl-2-associated X protein(Bax)表达量.结果 姜黄素对SW872前脂肪细胞及成熟脂肪细胞生长有抑制作用,并呈剂量-时间效应关系,不同剂量姜黄素作用成熟脂肪细胞72h,与对照组比较,抑制率分别为2.97%、3.48% 、19.76% 、85.03%和94.48%;DAPI染色镜下观察成熟脂肪细胞出现明显核皱缩、变形现象;随姜黄素剂量增加,PARP裂解产物Bax蛋白表达量呈上升趋势(P<0.01).结论 姜黄素促进SW872脂肪细胞凋亡,凋亡机制与线粒体密切相关.
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重组人白介素6抑制SW872脂肪细胞脂联素及其受体1的表达和脂联素的分泌
油酸诱导体外培养的SW872前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞,然后加入重组人白细胞介素6(rhIL-6)干预;RT-PCR方法检测脂联素、脂联素受体1和2 mRNA水平,ELISA方法检测细胞培养上清中脂联素蛋白的含量.结果 显示,rhIL-6以剂量和时间相关的方式抑制SW872脂肪细胞脂联素及其受体1mRNA的表达及脂联素的分泌,对脂联素受体2 mRNA的表达元影响.
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Visfatin对SW872脂肪细胞炎性因子分泌和表达的影响
目的 观察visfatin对SW872成熟脂肪细胞炎性因子TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和脂联素蛋白分泌及mRNA表达的影响.方法 体外培养SW872细胞,诱导细胞分化,不同浓度visfatin作用于SW872成熟脂肪细胞,孵育24 h后收获细胞培养上清和RNA,分别采用ELISA法和RT-PCR法榆测上清中TNF-α、MCP-1和脂联素的蛋白分泌及mRNA表达水平.结果 与对照组比较,50 μg/L visfatin即显著促进SW872脂肪细胞TNF-α、ICP-1分泌和mRNA表达及抑制脂联素分泌和mRNA表达;TNF-α、MCP-1和脂联素的蛋白分泌水平均较对照组显著增加[(169.77±13.69) vs (149.30±17.40) ng/g,(1.36±0.14)w(1.21±1.09) μg/g,(258.53±58.59) vs (330.59±65.00) μg P.<0.05],TNF-α和MCP-1 mRNA的表达较对照组显著增加[(0.50±0.02) vs (0.45±0.02),(0.55±0.03) vs (0.48±0.01)P.<0.05],而脂联索mRNA表达较对照组显著下降[(0.90±0.02) vs (0.94±0.04)P<0.05].当visfatin水平增加至250 μg/L时,脂肪细胞TNF-α[(303.20±17.50) ng/g]和NCP-1[(2.00±1.27) μg/g]的蛋白分泌水平较对照组均显著上升(Pa<0.01),而脂联素的蛋白分泌水平[(151.59±36.38) μg/g]则显著减少(P<0.01);同时,TNF-α和I～ICP-1的mRNA表达水平[(0.82±0.06) ng/g,(0.87±0.06) μg/g]较对照组亦显著增加(Pa<0.01),而脂联素的mRNA表达水平(0.58±0.04) μg/g则显著减少(P<0.01).结论 visfatin通过调节促炎性因子和抗炎因子的表达参与了SW872脂肪细胞炎性反应的发生发展.
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内脏脂肪素对SW872脂肪细胞葡萄糖转运的影响
目的 观察不同水平重组人内脏脂肪素(visfatin)对SW872脂肪细胞葡萄糖转运的影响,探讨visfatin在胰岛素抵抗形成中的意义.方法 体外培养SW872前脂肪细胞,当细胞完全汇合后,加入0.6 mmol/L油酸诱导SW872前脂肪细胞分化48 h,光学显微镜下观察SW872前脂肪细胞和成熟脂肪细胞形态的变化.以诱导分化成熟的SW872脂肪细胞为研究对象,利用2-脱氧-[3H]-右旋葡萄糖掺入法测定SW872成熟脂肪细胞的葡萄糖转运能力.结果 油酸诱导分化24 h SW872前脂肪细胞胞体由小变大,形态由梭形变为圆形,胞浆中出现细小脂滴;诱导48 h细胞体积进一步变大,细胞已完全分化,胞浆中脂滴明显增多;诱导分化72 h细胞呈戒环状,胞浆脂滴含量更多.用5、10 nmol/L visfatin作用24 h,对基础状态及胰岛素诱导的SW872成熟脂肪细胞葡萄糖转运无影响;25、50、100、200 nmol/L visfatin作用24 h,使基础状态葡萄糖转运率分别增加2.90%、7.70%、12.01%、12.29%(P<0.05,0.01);胰岛素诱导的SW872脂肪细胞葡萄糖转运率分别增加3.40%、16.37%、30.30%、30.83%(P<0.05,0.01).100 nmol/L visfatin刺激时,SW872脂肪细胞的基础状态和胰岛素诱导的葡萄糖转运率趋近于高峰,与50 nmol/L和对照组0 nmol/L比较均有统计学差异(Pa<0.01);200 nmol/L visfatin刺激时,与100 nmol/L visfatin刺激时的基础状态和胰岛素诱导的葡萄糖转运率比较无统计学差异(Pa>0.05).结论 visfatin可促进SW872脂肪细胞的葡萄糖转运,且以100 nmol/L的质量浓度刺激时,葡萄糖转运率趋近高峰.
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Visfatin对SW872脂肪细胞胰岛素信号分子蛋白表达的影响
目的:观察visfatin对胰岛素抵抗状态下的SW872成熟脂肪细胞胰岛素信号分子胰岛素受体底物-1(IRS-1)、胰岛素受体底物-2(IRS2)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)蛋白表达的影响.方法:体外培养SW872前脂肪细胞,诱导细胞分化成熟,建立胰岛素抵抗模型,用含有100 nmol/L visfatin的无血清培养液孵育1h后收获细胞,采用Western印迹法检测visfatin刺激前后信号分子IRS-1、IRS-2和PI3K的蛋白表达水平.结果:在正常状态下(正常组内比较),visfatin促进脂肪细胞IRS-1、IRS-2和PI3K的蛋白表达,分别增加了51.65％ (P＜0.01)、44.74％ (P＜0.01)和61.38％ (P＜0.01).在胰岛素抵抗状态下,visfatin刺激组的IRS-1、IRS-2和PI3K的蛋白表达水平,分别比基础状态组增加了26.98％(P＜0.05)、35.59％(P＜0.05)、27.61％ (P＜0.01).结论:在胰岛素抵抗状态下,visfatin通过调节脂肪细胞胰岛素信号分子IRS-1、IRS-2和PI3K蛋白表达而发挥促进葡萄糖转运、改善胰岛素抵抗的生物学作用.
