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从噬菌体展示抗体文库筛选对虾白斑综合征病毒的单链抗体
对虾白斑综合征是一种严重危害对虾养殖业的病毒性疾病.由于目前对其病原体对虾白斑综合征病毒(WSSV)的研究不够深入,所以对WSSV的有效防治仍然是一大难题.为此,用完整的对虾白斑综合征病毒粒子作为靶抗原固相包被,淘选噬菌体展示单链抗体文库,得到两个能够与WSSV结合的单链抗体:E2和H4.单链抗体H4能够结合病毒并抑制病毒对原代培养的对虾淋巴细胞的感染,这些结果表明此单链抗体具有开发为诊断试剂盒和抗病毒药物的潜力.
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cDNA微阵列结合抑制性差减杂交研究对虾白斑综合征病毒部分表达基因
通过抑制性差减杂交技术建立了包含对虾白斑综合征病毒表达性基因的差减文库,并用cDNA微阵列技术进行了鉴定,得到255个正向克隆.对其中的184个正向阳性克隆进行了测序,测序结果通过BLAST与GenBank中序列进行比对,共得到WSSV(white spot syndrome virus,WSSV)基因30个.此次首次鉴定了5个,其中WSV184具有调控蛋白的结构特征(Cys2/Cys2型锌指),WSV321和WSV322含跨膜结构,且存在可能的糖基化位点.有3个被其它研究推断无polyA结构的阅读框所处的mRNA应有polyA结构.进一步用Dot Northern blot对克隆号PCI118(含WSSV阅读框WSV321和WSV322)进行鉴定,表明确实存在该基因的转录.进而根据已报道的WSSV基因序列设计两条引物,用快速扩增cDNA末端技术,扩增WSV321和WSV322两个阅读框所处的cD-NA的5′端片段和3′端片段,分析得到其全长共1 109bp,与已报道的WSSV全基因序列(AF332093)的相关序列完全相同.该mRNA存在polyA,并有加尾信号AATAAA;两个阅读框都没有自己的TATA盒,但都有病毒RNA聚合酶Ⅱ的结合位点-CCAAT盒;它们编码的蛋白质分别有117和227个氨基酸,都存在可能的糖基化位点,其中WSV321一个,WSV322两个.
关键词： 对虾白斑综合征病毒 表达基因 斑点杂交 快速扩增cDNA末端 -
对虾白斑综合征病毒中国地方株变异区基因的比较
对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)是对虾养殖的主要病原之一,它是目前发现的基因组大的动物病毒,为环状双链DNA病毒[1,2],全基因组序列分析结果显示,对虾白斑综合征病毒和其他杆状病毒相差甚远,新病毒分类报告已将该病毒划归新建立的线头病毒科(Nimaviridae)白斑病毒属(Whispovirus)[3,4].目前GenBank公布有3个版本的WSSV全序列[1,2],其基因组大小的测定结果相差较大.
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对虾白斑综合征病毒胸腺嘧啶核苷酸合成酶基因的系统进化分析
目的为了对对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)中为保守的胸腺嘧啶核苷酸合成酶(WSV-TS)基因,进行该病毒的系统发育学研究.方法通过GenBankTM数据库和DNAMAN分析系统,对不同生物来源的胸腺嘧啶核苷酸合成酶进行同源性比较并构建了该基因的系统发育进化树.结果 :WSV-TS的氨基酸序列与来自高等生物,特别是同哺乳动物有着很高的同源性,而与多种病毒的同源性较低.结论 WSV-ts基因是WSSV基因组中为保守的基因,其进化树的构建对于理解WSSV的进化地位有重要的帮助.
关键词： 胸腺嘧啶核苷酸合成酶 对虾白斑综合征病毒 同源性分析 系统进化分析 -
对虾白斑综合征病毒ORF220基因在昆虫细胞内的表达及其分布
对虾白斑综合征病毒厦门分离株ORF220编码真核生物GP130受体同源蛋白.将ORF220和绿色荧光蛋白编码基因融合在一起克隆到昆虫杆状病毒表达载体pFastBacI,然后与AcBacmid共同转染DH10B细胞.用PCR鉴定含有ORF220和EGFP基因的重组质粒,提取纯化重组质粒并转染昆虫细胞进行表达.结果发现,DNA转染后3-5d可以在荧光显微镜下观察到绿色荧光,表明融合蛋白在昆虫系统内成功表达.用病毒上清液感染昆虫细胞进行时相观察,结果表明,ORF220蛋白在昆虫细胞的细胞质和细胞核内呈随机分布,没有特异的细胞定位.
