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家蚕核型多角体病毒广东株bro基因家族分析
对BmNPV广东株进行了空斑纯化,并对该基因组的bro基因家族进行克隆,获得4个bro基因序列(bro-a、b、c、d),与GenBank数据库中BmNPV bro基因序列及本实验室测定的重庆株的bro基因序列进行比较分析,结果表明广东株BmNPV bro基因存在插入及缺失,其氨基酸的改变主要发生在对应蛋白的N端部分;同时进行的bro基因的系统发生分析表明,广东株bro基因分别位于3个亚组中,广东株bro-d与日本T3、重庆CQ1株bro-d以及法国SC7株bro-Ⅲ属于亚组A,广东株broa、c与T3、CQ1株broa、c以及SC7株bro-Ⅱ属于亚组B,广东株bro-b与T3、CQ1株bro-b、e以及SC7株bro-Ⅰ属于亚组C,bro基因进化与地理位置的相关性不明显.根据bro基因在四个不同株系基因组中的位置特征,进一步支持了Kang等的观点:bro-d是BmNPV生存所必需的,bro-a和bro-c相互间功能互补.同时推测:SC7株的3个bro基因可能是BmNPV bro家族出现的简约形式.
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山东临沂地区下呼吸道感染患者卡他布兰汉菌耐药性分析及 bro 基因分型检测
目的：分析山东临沂地区下呼吸道感染患者痰液样本中分离的卡他布兰汉菌对常用抗菌药物的耐药性及bro基因分型对耐药性的影响。方法连续收集2010年1月至2014年12月山东省临沂市人民医院镜检合格的下呼吸道感染患者痰液样本，将其分别划线接种于4块不同琼脂培养基进行细菌分离培养及鉴定。对分离出的卡他布兰汉菌进行药敏试验和β-内酰胺酶检测，同时采用PCR扩增结合限制性内切酶分析法对分离株进行bro基因分型。采用χ2检验比较不同bro基因型菌株对抗菌药物的耐药率。结果5年来共分离出497株卡他布兰汉菌，以冬季检出多（共221株）。所有菌株对厄他培南和氯霉素完全敏感，对阿莫西林／克拉维酸和头孢呋辛耐药率较低（≤2.8％），对复方磺胺甲噁唑、红霉素和氨苄西林的耐药率较高，为47．6％～89．8％，且呈逐年增加趋势，但差异无统计学意义（P＞0．05）。共检出产β-内酰胺酶卡他布兰汉菌412株（412／497，82．9％），均为bro基因阳性菌株，bro基因阳性菌株对红霉素、复方磺胺甲噁唑、左氧氟沙星和氨苄西林的耐药率均高于bro阴性菌株（χ2＝12．16、16．18、8．41和200．00，P＜0．05）。经bro基因分型发现，bro-1型菌株占94．9％（391／412），bro-2型菌株占5.1％（21／412），bro-1型与bro-2型菌株对常用抗菌药物的耐药率差异无统计学意义（P＞0．05）。结论临床分离卡他布兰汉菌产β-内酰胺酶阳性率较高，且多为bro-1型阳性株。菌株对碳青霉烯类抗菌药物、头孢菌素及β-内酰胺酶抑制剂敏感率较高，可作为治疗呼吸道卡他布兰汉菌感染的首选。
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卡他莫拉菌研究进展
卡他莫拉菌是儿童上颌窦炎、中耳炎、肺炎等呼吸道感染的第3位常见致病菌,仅次于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌,目前产酶耐药株比例已超过90%.卡他莫拉菌通过产生BRO 内酰胺酶对青霉素耐药.卡他莫拉菌产生的内酰胺酶分为BRO-1、BRO-2及BRO-3,由染色体基因编码,而且编码基因较易在细菌间转移.与其他已知β内酰胺酶不同,BRO基因是卡他莫拉菌新近获取的外源基因,21个新突变发生于BRO基因的启动子.
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儿童携带卡他莫拉菌的耐药性及bro基因分型研究
目的对儿童携带214株卡他莫拉菌分离株产酶率和9种抗生素敏感性测定,研究产酶株β-内酰胺酶耐药基因特征.方法采用英国抗生素化疗学会(BSCA)琼脂稀释法进行抗生素小抑菌浓度测定;用Nitrocefin纸片琼脂扩散法检测β-内酰胺酶;PCR扩增结合限制性内切酶分析方法对分离株进行bro基因分型.结果 214株卡他莫拉菌中β-内酰胺酶产酶率为94.4%.产酶株对β-内酰胺类抗生素:氨苄西林、头孢呋辛、头孢克洛的MIC90分别为32mg/L、2mg/L和8mg/L,明显高于非产酶株的0.5 mg/L,1.0 mg/L和0.5 mg/L;产酶株对氨苄西林、头孢呋辛、头孢克洛耐药率分别为95%、46.5%和76.2%,明显高于非产酶株组(0%)(χ2=100.889,8.159,28.961 P均＜0.001);产酶株与非产酶株组对头孢噻肟、非β-内酰胺类抗生素红霉素、环丙沙星、氯霉素和四环素敏感性无显著差异,其总体敏感性分别为100%、95.8%、100%、100%、34.1%,所有分离株对复方磺胺甲噁唑产生耐药(100%),MIC50和MIC90高达32 mg/L和128 mg/L.202例产酶株经bro基因分型,69.8%(141/202)为bro-Ⅰ型,30.2%(61/202)为bro-Ⅱ型.bro-Ⅰ型携带菌株对β-内酰胺类抗生素的MIC50和MIC90高于bro-Ⅱ型的耐药株.结论北京地区携带的卡他莫拉菌β-内酰胺酶产酶率较高,产酶株对氨苄西林耐药较为严重,β-内酰胺耐药株以携带bro-Ⅰ基因为主,对β-内酰胺类抗生素的耐药性较bro-Ⅱ基因携带株明显高.
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棉铃虫单核衣壳核多角体病毒3个bro基因的原核表达与抗体制备
根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(HaSNPV)基因组全序列,设计引物,用PCR的方法扩增得到bro-a、bro-b和bro-c三个全长基因.将这三个基因的片段分别克隆至原核表达载体pProExHTb,经IPTG诱导,在E.coli DH50菌株中得到了目的基因的高效表达.表达的目的蛋白大小分别为32kDa、64kDa和58kDa,经SDS-PAGE分离纯化,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体.抗体经1:2500倍稀释后用于WestemBlot分析,获得特异性显色信号,所制备的三种抗体适合用作bro基因的功能的进一步研究.
关键词： 棉铃虫单核衣壳核多角体病毒 bro基因 克隆 表达 抗体 -
儿童呼吸道卡他莫拉菌感染状况及耐药性和耐药基因的研究
目的 探讨儿童呼吸道感染卡他莫拉菌流行病学特点及其耐药性的现状,研究产β-内酰胺酶株耐药基因特征,指导临床诊断及治疗.方法 对2014年3月-2015年2月份本院儿科门诊和住院部下呼吸道感染患儿的痰标本进行卡他莫拉菌分离培养,并进行鉴定及药敏试验.PCR扩增结合限制内切酶分析方法对分离株进行bro基因分型.结果 (1)卡他莫拉菌分离率为13.50％,主要多见于4岁以下患儿,冬季为高发,混合感染率为46.20％,以混合肺炎链球菌为多见.(2)分离的840株卡他莫拉菌的β-内酰胺酶的阳性率为92.50％,其中对阿莫西林/克拉维酸、复方磺胺甲恶唑、四环素的敏感性高达90％以上,但对红霉素、克拉霉素、阿奇霉素的非敏感性也在30％以上.(3)卡他莫拉菌bro基因分型结果:63株(7.50％)bro阴性,577株(68.70％)bro-1阳性,200株(23.81％)bro-2阳性.结论 儿童呼吸道卡他莫拉菌的感染与年龄、季节有关,合并多种细菌的混合感染率较高,此次检出的卡他莫拉菌呈高产β-内酰胺酶,以携带bro-1基因为主.临床诊疗要密切监测卡他莫拉菌感染的流行病学特点及耐药情况.
