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表达CRT/E7融合蛋白的人乳头瘤病毒DNA疫苗对肿瘤生长和血管生成抑制作用的研究
研究HPV6b E7/CRT DNA疫苗免疫保护,清除已有感染和相关肿瘤细胞及其血管生成抑制作用,分析CRT抗血管生成的功能片段,为筛选高效的HPV疫苗提供实验依据.用重组质粒pcDNA3.1(+)-GFP-CRT120/HPV6bE7、pcDNA3.1(+)-GFP-HPV6bE7、pcDNA3.1(+)-GFP-CRT120、pcDNA3.1(+)-GFP-CRT180/HPV6bE7、pcDNA3.1(+)-GFP-CRT180通过肌内注射途径免疫C57BL/6小鼠.Matrigel法进行抗血管活性检测;B16/HPV6bE7细胞接种于C57BL/6雌性小鼠建立荷瘤模型,观察各组DNA疫苗对HPV6bE7基因的荷瘤组织的出瘤时间和肿瘤大小的影响.结果显示:重组DNA疫苗pcDNA3.1-CRT180/HPV6bE7和pcDNA3.1-CRT180在动物体内能对bFGF诱导的新生血管的生成有明显的抑制作用;CRT180/HPV6bE7和CRT180能显著抑制荷瘤的大小且CRT180/HPV6bE7免疫组较其他组能明显延缓荷瘤的形成时间、生长速率以及肿瘤重量.CRT180/HPV6bE7免疫组较其他组能诱导更强的血管抑制作用和部分抑制肿瘤生长,推测抑制血管的功能片段存在于CRT 120～180 aa片段上.
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壳聚糖纳米化的结核杆菌ESAT-6和FL重组DNA疫苗对小鼠产生Th1和Th2型细胞因子的影响
目的:探讨壳聚糖纳米包被的结核杆菌早期分泌性抗原(6 kd early secretory antigenic target,ESAT-6)与fms样酪氨酸激酶3配体(fms-like tyrosine kinase 3 ligand,FL)重组DNA疫苗接种C57BL/6小鼠对其Thl和Th2型细胞因子生成的影响.方法:制备壳聚糖(nano-chitosan,CS)纳米颗粒,然后用CS纳米粒包被本室构建的结核杆菌ESAT-6与FL重组质粒(nanoESAT-6-FL)、ESAT-6质粒(nano-ESAT-6)、FL质粒(nano-FL)和pIRES载体(nano-pIRES),并进行电镜和Western blot鉴定.此后将上述质粒分别接种小鼠,同时给小鼠接种未用壳聚糖纳米颗粒包被的上述对应质粒,并设PBS、CS纳米粒及BCG作为对照.接种后9周,取小鼠脾细胞进行培养,并用结核菌纯化蛋白衍生物(purified protein derivatives tuberculin,PPD)给予刺激72 h,然后用ELISA试剂盒检查小鼠脾细胞上清液中的Th1型细胞因子(IFN-γ、IL-12)和Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)的分泌水平.结果:成功制备出壳聚糖纳米包被的结核杆菌ESAT-6和FL重组质粒(包括其他几种质粒),并证实被壳聚糖纳米包被的质粒可在真核细胞中表达.用壳聚糖纳米包被的ESAT-6-FL重组质粒免疫小鼠,其脾细胞上清液中的IFN-γ和IL-12水平显著高于未用壳聚糖纳米包被的相应质粒免疫组和其他对照组,而IL-4和IL-10的水平与未用壳聚糖纳米包被的相应质粒免疫组和其他实验组对照组相比均无明显升高.结论:壳聚糖纳米化的ESAT-6-FL重组质粒疫苗接种小鼠能够显著提高小鼠体内Th1型细胞因子的水平.提示用壳聚糖纳米包被结核杆菌ESAT-6-FL重组DNA疫苗能提高其细胞免疫效果.
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单纯疱疹病毒Ⅱ型CTL表位DNA疫苗的Th1/Th2免疫应答研究
目的 探讨单纯疱疹病毒II型(HSV-2)CTL表位疫苗对小鼠Th1/Th型免疫应答的影响.方法 用构建的HSV-2 pVAX-gD-CTL重组质粒免疫BALB/c小鼠3次,末次免疫后第4周检测小鼠血清中gD IgG水平;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况;ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中INF-γ,IL4水平;流式细胞仪测定小鼠CD4+,CD8+T淋巴细胞亚群.结果 HSV-2 pVAX-gD-CTL疫苗免疫小鼠后可以诱导脾淋巴细胞增殖及分泌INF-γ和IL4,诱导CD4+,CD8+T细胞百分比的升高;并能刺激血清HSV-2 gD特异性抗体的产生.其中pVAX-gD-CTL组在脾淋巴细胞刺激指数及其分泌INF-γ水平、CD4+,CD8+T细胞百分比升高方面均显著高于pVAX-gD对照组.结论 CTL表位对单纯疱疹Ⅱ型重组DNA疫苗诱导的Th1型免疫应答有促进作用.
关键词： 单纯疱疹病毒Ⅱ型 CTL表位 重组DNA疫苗 Th1/Th2免疫应答
