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丹参酮Ⅱ A对人脐静脉内皮细胞系一氧化氮合酶和磷脂酰肌醇-3激酶的影响
目的 探讨丹参酮ⅡA促血管生成的作用机制.方法 将人脐静脉内皮细胞系(HUV-EC-C)分为空白组、二甲基亚枫(DMSO,终浓度1％)组、血管内皮生长因子(VEGF,终浓度5μg/L)组、丹参酮ⅡA(终浓度6mg/L)组,分别加入相应药物48h后,镜下观察各组细胞形态,并采用蛋白质印迹法测定各组细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷酯酰肌醇-3激酶(PI3K)表达情况.结果 VEGF组和丹参酮ⅡA组HUV-EC-C细胞形态饱满,丰度明显增加,细胞间隙缩小,均未见脱落.与空白组比较,VEGF组和丹参酮ⅡA组细胞eNOS、PI3K蛋白表达均显著增强(P＜0.05或P＜0.05). 结论 丹参酮ⅡA能提高HUV-EC-C内PI3K和eNOS蛋白表达,可能是其促血管生成的作用机制之一.
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KLF2对 ox-LDL 诱导内皮细胞 microRNA-146 a及促炎细胞因子表达的影响
目的：探讨Krüppel样因子2（KLF2）对氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipo-protein， ox-LDL）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）微小RNA 146a（microRNA-146a， miR-146a）及细胞因子单核细胞趋化蛋白（MCP-1）和白细胞介素-6（IL-6）表达的影响。方法构建 KLF2过表达腺病毒载体（ rAAV-KLF2）及KLF2-siRNA，分别转染HUVECs及ox-LDL诱导的HUVECs。于0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h收集HUVECs，采用实时荧光定量PCR，检测HUVECs miR-146a的表达；设计合成锁核酸（the locked nucleic acid，LNA））修饰的anti-miR-146a的反义核苷酸（LNA-anti-miR-146a）转染HUVECs。收集各组细胞上清，采用双抗体夹心ABC-ELISA方法检测MCP-1及IL-6的表达。结果KLF2明显抑制静息及ox-LDL诱导的HUVECs miR-146a的表达，并显著减少ox-LDL诱导HUVECs MCP-1、IL-6的表达，且具有时间依赖性；miR-146 a 沉默可削弱ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应，而且部分逆转了KLF2对内皮细胞炎症反应的抑制作用。结论 KLF2通过下调miR-146 a的表达抑制ox-LDL活化的HUVECs MCP-1、IL-6的分泌。
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"人脐静脉内皮细胞系"ECV304实际上是人膀胱癌细胞系T24
细胞系间的交叉污染是全世界生物医学研究领域面临的重大难题之一.多项研究显示18%～36%的人肿瘤细胞系为假细胞系或身份不正确[1].
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CD4+CD25+调节性T细胞对内皮细胞抗原提呈功能的影响及机制
目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)对内皮细胞抗原提呈功能的影响及机制.方法:磁性细胞分离器(MACS)分离CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25-T细胞.在ox-LDL作用下,HUVECs与CD4+CD25+T细胞共培养,24小时后收集HUVECs.应用流式细胞术测定HUVECs抗原提呈分子(HLA DR,CD86,CD80)的表达,Cell Counting Kit-8法(CCK-8) 测定HUVECs刺激CD4+CD25- T细胞增殖的能力,Transwell小室实验初步探讨Treg作用于HUVECs的具体机制.结果:与对照组比较,Treg可显著抑制HUVECs抗原提呈分子的表达及刺激T细胞增殖的能力.用Transwell隔离后,与or-LDL刺激组比较,HUVECs抗原提呈分子表达及其刺激T细胞增殖的能力无明显变化.结论:Treg可显著抑制HUVECs抗原提呈能力,其作用机制可能为下调CD86的表达,且依赖细胞直接接触.
