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脾气虚模型大鼠海马与下丘脑神经元线粒体分裂因子和线粒体分裂蛋白1的表达
目的 观察脾气虚模型大鼠海马、下丘脑神经元线粒体形态学变化及其分裂情况,探讨脾气虚的发生机制.方法 20只SPF级雄性SD大鼠随机分为非脾气虚组和脾气虚模型组,每组10只.脾气虚模型组采用饮食失节+劳倦方法制脾气虚模型.透射电镜观察海马CA1区及下丘脑神经元线粒体的形态学变化;ELISA法检测海马和下丘脑组织ATP含量;Western blot法检测上述组织线粒体分裂因子(MFF)和线粒体分裂蛋白1(Fis1)的表达.结果 非脾气虚组线粒体较丰富,形态基本正常,而脾气虚模型组线粒体数量减少,其中海马CA1区神经元线粒体出现肿胀、嵴减少,甚至空泡化,而下丘脑还存在较多线粒体自噬现象.与非脾气虚组比较,脾气虚模型组体重、进食量、饮水量、运动距离、站立次数以及前肢抓力均下降,海马和下丘脑神经元ATP含量降低,MFF及Fis1蛋白表达升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论 海马和下丘脑相关神经元线粒体功能低下及其促分裂成分表达增加与脾气虚的发生密切相关.
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脾气虚模型大鼠海马与下丘脑神经元线粒体分裂因子和线粒体分裂蛋白1的表达
目的 观察脾气虚模型大鼠海马、下丘脑神经元线粒体形态学变化及其分裂情况,探讨脾气虚的发生机制.方法 20只SPF级雄性SD大鼠随机分为非脾气虚组和脾气虚模型组,每组10只.脾气虚模型组采用饮食失节+劳倦方法 制脾气虚模型.透射电镜观察海马CA1区及下丘脑神经元线粒体的形态学变化;ELISA法检测海马和下丘脑组织ATP含量;Western blot法检测上述组织线粒体分裂因子(MFF)和线粒体分裂蛋白1(Fis1)的表达.结果 非脾气虚组线粒体较丰富,形态基本正常,而脾气虚模型组线粒体数量减少,其中海马CA1区神经元线粒体出现肿胀、嵴减少,甚至空泡化,而下丘脑还存在较多线粒体自噬现象.与非脾气虚组比较,脾气虚模型组体重、进食量、饮水量、运动距离、站立次数以及前肢抓力均下降,海马和下丘脑神经元ATP含量降低,MFF及Fis1蛋白表达升高(P ＜0. 05,P ＜0. 01).结论 海马和下丘脑相关神经元线粒体功能低下及其促分裂成分表达增加与脾气虚的发生密切相关.
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MFF在肝癌中的表达及其生物学作用
目的 探讨线粒体分裂因子(MFF)在肝癌中的表达与生物学作用.方法 ①用实时荧光定量PCR (qPCR)、Western blotting及免疫组织化学方法,检测MFF在肝癌组织与细胞株中的表达.②小干扰RNA(siRNA)干涉MFF表达后,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)与克隆形成实验检测siCtrl、si-MFF#1、si-MFF#2组MFF对肝癌细胞增殖的影响.③siRNA干涉MFF表达后,用Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测MFF对肝癌细胞凋亡的影响.结果 ①MFF在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织[mRNA水平M(QR):0.292(0.443)∶0.235(0.333),Z=-4.166,P＜0.001;蛋白水平M(QR)∶5.414(4.545)∶3.120(3.955),Z=-3.961,P＜0.001];MFF在所有被检测肝癌细胞株中的表达均高于正常肝细胞.②干涉MFF可显著抑制肝癌细胞增殖(siCtrl vs.si-MFF#1:5.29±0.34:3.34±0.37,P=0.014;siCtrl vs.si-MFF#2:5.29±0.34∶3.09±0.40,P=0.010);干涉MFF可显著抑制肝癌细胞克隆形成(siCtrl vs.si-MFF#1:95.35±21.20:37.56±10.61,P=0.003;siCtrl vs.si-MFF#2:95.35±21.20:41.23±10.82,P=0.004).③干涉MFF可明显促进肝癌细胞凋亡(siCtrl vs.si-MFF#1:9.56％±1.70％:20.08％±2.03％,P＜0.001;siCtrl vssi-MFF#2:9.56％±1.70％:21.14％±1.38％,P＜0.001).结论 MFF在肝癌中高表达,可促进肝癌细胞增殖并抑制凋亡,提示MFF是潜在的癌基因与肿瘤治疗靶标.
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线粒体分裂因子促进肝癌转移的作用
目的 研究线粒体分裂因子(MFF)在肝癌转移中的调控作用.方法 利用免疫组化实验,检测12对原发灶组织与转移灶组织中MFF的表达,以明确肝癌转移过程中MFF的表达变化;下调MFF表达后,用细胞划痕实验检测对肝癌细胞迁移的影响;下调MFF表达后,用Transwell实验检测对肝癌细胞侵袭的影响.结果 肝癌转移灶组织中MFF表达明显高于原发灶[(0.70±0.06)vs(0.43±0.04)],差异有统计学意义(P<0.05);下调MFF可明显抑制肝癌细胞的迁移[siCtrl vs si-MFF-1 vs si-MFF-2=(77.85±3.65)vs(48.32±1.53)vs(45.32±2.76)],差异有统计学意义(P<0.05);下调MFF可明显抑制肝癌细胞的侵袭[siCtrl vs si-MFF-1 vs si-MFF-2=(29.31±3.53)vs(18.72±2.86)vs(17.68±2.03)],差异有统计学意义(P<0.05).结论 MFF表达在肝癌转移过程中显著升高,促进了肝癌细胞的迁移与侵袭,提示MFF分子是潜在的肝癌治疗靶点.
