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不同产地浙贝母药材中3种活性成分的分析研究
目的:利用RP-HPLC-ELSD测定不同产地的浙贝母类药材中的浙贝母碱、去氢浙贝母碱、浙贝宁的含量.方法:Xterra RP18色谱柱(3.9 mm×150 mm,5 μm),流动相乙腈-10 mmol·L-1NH4HCO3(pH 10.10),梯度洗脱,以ELSD检测.结果:浙贝母碱在0.12～24.0 μg,去氢浙贝母碱在0.13～26.0 μg,浙贝宁在0.16～31.0 μg与峰面积的对数值呈线性关系;平均回收率分别为98.2%,98.2%,96.5%;RSD分别为1.3%,1.7%,2.2%.结论:本方法用于测定浙贝母药材中的主要生物碱浙贝母碱、去氢贝母碱、浙贝宁的含量简便、准确.
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浙贝母碱对A549/顺铂耐药肺癌细胞株核苷酸ERCC1基因及LRP表达的影响
目的 观察浙贝母碱对肺癌A549/顺铂(DDP)耐药细胞切除修复互补基因1(excision repair cross-com plementation 1,ERCC1)及肺耐药蛋白(lung resistant protein,LRP)表达的影响.方法 体外培养肺癌A549/DDP细胞,将对数生长期的细胞分为空白对照组、DDP组、川芎嗪组(DDP加川芎嗪)及浙贝母碱组(DDP加浙贝母碱).药物作用48 h后,采用RT-PCR法检测ERCC1 mRNA表达,细胞免疫荧光法检测细胞LRP表达水平.结果 DDP组与空白对照组ERCC-1 mRNA及LRP蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与DDP组比较,川芎嗪及浙贝母碱组ERCC1 mRNA及LRP蛋白表达水平明显降低(P＜0.05);浙贝母碱组ERCC1 mRNA及LRP蛋白表达水平明显低于川芎嗪组(P＜0.05).结论 浙贝母碱可逆转肺癌A549/DDP细胞株的多药耐药,其作用机制可能与抑制ERCC1mRNA表达及LRP表达有关.
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HPLC-ELSD法测定胃可宁片中贝母素甲和贝母素乙含量
目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定胃可宁片中浙贝母的贝母素甲和贝母素乙含量.方法:采用Kromasil C18(4.6mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水-二乙胺(69.8∶29.9∶0.3,V/V/V)为流动相进行洗脱,流速1.0 ml/min,柱温35℃,漂移管温度100℃,气体流速2.1L/min.结果:贝母素甲在1.001 ～5.005ug范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均加样回收率为99.60％,相对标准偏差(RSD)=1.74％(n=9);贝母素乙在0.506～2.530ug范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均加样回收率为100.01％,RSD =0.89％ (n =9).结论:该法操作简便,方法可靠,结果准确,灵敏度高,重现性好,可作为该产品质量控制的方法.
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浙贝母碱对肺癌A549/DDP细胞多药耐药的逆转作用观察及机制探讨
目的 观察浙贝母碱对肺癌A549/DDP细胞多药耐药的逆转作用,并探讨其可能的机制.方法 将对数生长期的细胞随机分成2组,对照组分别加入不同浓度的DDP,实验组在对照组基础上再加入400 μg/mL的浙贝母碱；采用MTT法测算细胞增殖抑制率,计算两组细胞DDP的半数抑制浓度(IC50)及浙贝母碱的逆转倍数.将对数生长期的细胞分为3组,空白对照组不加任何药物,对照组加入DDP,实验组在对照组基础上再加入400 μg/mL的浙贝母碱；药物作用48h后,采用流式细胞术测算细胞凋亡率,用细胞免疫荧光法检测细胞中的人肺耐药蛋白(LRP).结果 实验组DDP的IC50为4.15 μg/mL,对照组为15.46μg/mL,浙贝母碱的逆转耐药倍数为3.73.培养48h后,空白对照组细胞凋亡率为2.56％±0.44％、LRP蛋白阳性细胞为(9.8±1.92)个/HP,对照组分别为为13.5％±1.42％、(9.2±1.9)个/HP,实验组为38.16％±2.25％、(5.8±1.3)个/HP；实验组与对照组、空白对照组比较,P均＜0.05.结论 浙贝母碱可逆转肺癌A549/DDP细胞株的多药耐药,其作用机制可能与其促进耐药细胞凋亡、下调LRP蛋白表达有关.
