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黄连总生物碱对大鼠胃黏膜损伤的保护作用及其机制研究
目的:采用幽门螺旋杆菌脂多糖诱导的胃炎动物模型考察黄连总生物碱(TA)对黏膜炎症反应的作用及可能机制.方法:幽门螺旋杆菌脂多糖(Helicobacter pylori LPS)灌胃,连续4 d即可引起急性胃炎的黏膜反应症状,分组给予50,100,200 mg·kg-1 TA后,组织学观察病变及用药后的改善情况;一氧化氮合酶检测试剂盒检测TA对组成型(cNOS)和诱导型(N0S-2)一氧化氮合酶的影响;肿瘤坏死因子(TNF-α)检测试剂盒测定TA对胃黏膜TNF-α生成的影响.结果:H.pylori LPS可显著刺激胃黏膜上皮细胞凋亡,增强黏膜组织NOS-2的表达,并降低cNOS的表达,同时增加血清中TNF-α含量.高、中、低剂量TA可显著降低H.pylori LPS诱导的胃黏膜上皮细胞凋亡发生,同时抑制NOS-2的表达,增强cNOS的表达,并抑制血清中TNF-α的含量.结论:TA对H.pylori LPS引起的大鼠胃部炎症有保护作用,其机制可能是由于TA抑制胃炎时黏膜细胞的凋亡有关,同时TA可通过影响cNOS和NOS-2的表达调节NO的生成,并抑制TNF-α生成,从而减轻胃部炎症反应的发生.
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NF-κBp65特异性siRNA的筛选和功能鉴定
目的:筛选有效的核因子-κB(NF-κB)p65特异性小干扰核糖核酸(siRNA),优化反应条件,用来抑制白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞中一氧化氮合酶-2(NOS-2)和环氧合酶-2(COX-2)的表达,探讨siRNA技术在关节炎治疗方面的应用.方法:体外转录合成NF-κBp65特异性siRNA,质脂体转染软骨细胞,筛选出有效的siRNA.将筛选的siRNA转染培养的软骨细胞,再用IL-1β刺激诱导软骨细胞,提取蛋白质和RNA.利用RT-PCR和Western blot从mRNA和蛋白质两水平检测NF-κBp65、NOS-2和COX-2的表达,采用凝胶电泳迁移率分析(EMSA)测定NF-κB的活性.结果:NF-κBp65特异性siRNA有效干扰NF-κBp65的表达,降低NF-κB的活性,抑制IL-1β诱导的NOS-2和COX-2的表达.结论:NF-κBp65特异性siRNA可用于关节炎治疗的实验研究.
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哮喘豚鼠气道上皮细胞Fas、NOS-2的表达
目的:检测哮喘豚鼠气道上皮细胞Fas、NOS-2的表达,评价两者在哮喘发病机制中的作用.方法:24只豚鼠随机分为3组:①哮喘组.用10%卵白蛋白1 ml 腹腔注射致敏,2周后,用1%卵蛋白超声雾化吸入,连续激发10次,复制豚鼠哮喘模型.②地塞米松(Dxm)处理哮喘组.诱喘同哮喘组,在每次激发前5 min 腹腔注射Dxm 0.5 mg/kg.③正常对照组.用生理盐水代替诱喘剂.应用免疫组化方法(SP法)检测气道上皮细胞Fas、NOS-2的表达.结果:哮喘组豚鼠气道上皮细胞Fas的表达上调[0.223 7±0.032 4,与正常组(0.166 6±0.028 6),P＜0.001];Dxm促进Fas的表达(0.241 9±0.036 2,与正常组相比,P＜0.001;但与哮喘组相比,差别无显著性);正常对照组有较少的阳性表达.哮喘组豚鼠气道上皮细胞NOS-2的表达明显上调(0.256 7±0.034 5),Dxm 组阳性信号稍弱(0.231 8±0.022 9),正常对照组有较少的阳性表达(0.182 9±0.025 9).但哮喘组与Dxm组之间差别无显著性(P＞0.05).哮喘豚鼠气道上皮细胞NOS-2、Fas的改变呈总体正相关(r=0.789,P＜0.01).结论:NOS-2为上皮损伤性因素,Fas可能为修复性因素.两者表达的同时上调说明气道上皮的损伤与修复同时进行.
