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硝菔通结方对功能性便秘大鼠结肠组织中VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路的影响
目的:探讨硝菔通结方对功能性便秘大鼠结肠组织中VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路的影响.方法:SD雄性大鼠150只,随机分为5组,分别为正常组、模型组、硝菔通结方高、中、低剂量组(380,190,95 g·kg-1),每组30只,除正常组外采用复方地芬诺酯喀法建立SD大鼠功能性便秘模型,给予不同剂量硝菔通结方ig,共给药4周.检测大鼠首粒黑边排出时间及粪便含水率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白质免疫印迹(Western blot)分别检测治疗1,2,3周不同时间点大鼠结肠组织中血管活性肠肽(VIP),环磷酸腺苷(cAMP),蛋白激酶A(PKA),水通道蛋白3(AQP3) mRNA及蛋白质的表达变化.结果:与正常组比较,模型组大鼠首粒黑便排出时间显著延长,粪便含水率显著降低(P＜0.01),结肠组织中VIP,cAMP,PKA,AQP3的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,硝菔通结方各剂量组大鼠首粒黑便排出时间显著缩短,粪便含水率明显增加(P＜0.05,P＜0.01),结肠组织中VIP,cAMP,PKA,AQP3的mRNA和蛋白表达水平均有升高趋势,且高、中剂量组较低剂量组升高更显著,给药后第2,3周较第1周的指标变化更显著(P＜ 0.05,P＜0.01).结论:硝菔通结方能够调节胃肠动力和改善肠道水液代谢治疗功能性便秘,其机制可能是通过干预VIP-cAMP-PKA-AQP3通路来实现,并且具有一定的时间和剂量依赖性.
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从醛固酮(ALD)的分泌与合成探讨硝菔通结方从肾论治便秘的作用机制
目的:观察硝菔通结方对功能性便秘大鼠醛固酮(ALD)合成和分泌的影响,从现代医学肾脏调节水液代谢的角度揭示硝菔通结方从肾论治便秘的作用机制.方法:48只成年雄性SD大鼠采用随机数字表法分为空白组(8只)和造模组(40只),造模组灌胃复方地芬诺酯混悬液6周复制便秘模型后随机分为模型组(FC组)、硝菔通结方高、中、低剂量组、阳性药物对照组(苁蓉通便口服液组,简称口服液组).各治疗组给予不同剂量的硝菔通结方,阳性药物对照组给予苁蓉通便口服液(后简称口服液组)灌胃1个月.观察各组大鼠的一般情况以及结肠含水率,ELISA法检测各组大鼠血清中醛固酮(ALD)、肾素(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素转化酶(ACE)的含量,RT-PCR法检测肾脏组织中MRmRNA的水平,Western-Blot法检测结肠组织中AQP3的表达.结果:模型组大鼠粪便量少、质地干硬,结肠含水率明显降低,血清中ALD、PRA、AngⅡ、ACE的含量升高,肾脏组织中MRmRNA表达升高,结肠组织中AQP3的表达明显升高;与模型组比较,各剂量硝菔通结方治疗组以及口服液组大鼠粪便量增加且质地稀软,结肠含水率增高,血清中ALD、PRA、AngⅡ、ACE的含量均降低,肾脏组织中MRmRNA表达降低,结肠组织中AQP3的表达显著降低.结论:肾脏能通过调节ALD合成与分泌而影响肠道的水液代谢,这可能是中医从肾论治便秘的科学内涵之一,硝菔通结方可通过影响ALD合成与分泌调节肠道的水液代谢,从而对功能性便秘发挥治疗作用.
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基于“肾主水司二便”探讨硝菔通结方对功能性便秘大鼠水通道蛋白表达的影响
目的:观察硝菔通结方对功能性便秘大鼠肾脏以及结肠组织水通道蛋白的影响,从现代医学肾脏调节水液代谢的角度探讨中医“肾主水司二便”的科学内涵,揭示硝菔通结方从肾论治便秘的作用机制.方法:48只成年雄性SD大鼠,采用随机法分为空白组(8只)和造模组(40只),造模组灌胃复方地芬诺酯混悬液6周复制便秘模型后随机分为模型组(FC组)、硝菔通结方高、中、低剂量组、阳性药物对照组(苁蓉通便口服液组,简称口服液组).各治疗组给予不同剂量的硝菔通结方、阳性药物对照组给予苁蓉通便口服液(后简称口服液组)灌胃1个月.观察各组大鼠的一般情况,采用ELISA法检测各组大鼠血清中精氨酸加压素(AVP)、环磷酸腺苷(cAMP)的含量,Western-Blot法检测肾脏组织中AQP2以及AQP3的表达,结肠组织中AQP3的表达.结果:与空白组比较,模型组大鼠粪便量少、质地干硬,血清中AVP、cAMP的含量升高(P＜0.05),肾脏组织中AQP2以及AQP3的表达明显升高(P＜0.01),结肠组织中AQP3的表达明显升高(P＜0.01).与模型组相比,各剂量硝菔通结方组以及口服液组大鼠粪便量增加且质地稀软,血清中AVP、cAMP的含量降低(P＜0.05),肾脏组织中AQP2以及AQP3的表达明显降低(P＜0.01),结肠组织中AQP3的表达明显降低(P＜0.01).结论:肾脏能通过调节水通道蛋白而影响肠道的水液代谢,这可能是中医“肾主水司二便”的科学内涵之一;硝菔通结方可通过影响肾脏组织的水通道蛋白而纠正肠道水液代谢紊乱,从而对功能性便秘发挥治疗作用.
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硝菔通结方对功能性便秘大鼠在体结肠肌电及血清中胃动素胃泌素的影响
目的:探讨硝菔通结方对功能性便秘大鼠在体结肠肌电及血清中胃动素、胃泌素的影响.方法:以SD大鼠为实验对象,采用复方地芬诺酯灌胃法建立SD大鼠功能性便秘模型,通过硝菔通结方灌胃给药,观察各组大鼠大便量、质等一般表现,Power Lab检测大鼠在体结肠肌电,Elisa检测大鼠血清中胃动素、胃泌素的含量.结果:与正常对照组比较,模型组大鼠在体结肠肌电慢波频率减慢,振幅增大,血清中胃动素、胃泌素的含量明显减少,有极显著性差异(P＜0.01);硝菔通结方不同剂量灌胃给药后,大剂量组大鼠在体结肠肌电慢波频率增加、振幅降低,有显著性差异(P＜0.01),硝菔通结中、小剂量组频率增加(P＜0.05),振幅变化无显著性差异(P＞0.05);硝菔通结方大、中剂量组大鼠血清中胃动素含量明显升高,大剂量组大鼠血清中胃泌素含量也明显升高,差异性显著(P＜0.01).结论:硝菔通结方能改善功能性便秘大鼠在体结肠肌电慢波节律异常,提高大鼠血清中胃动素、胃泌素的含量,从而起到治疗功能性便秘的作用.
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硝菔通结方对便秘大鼠血清5-HT和结肠组织AQP3的影响
目的:观察硝菔通结方对便秘模型大鼠血清5-HT和结肠组织AQP3表达的影响,揭示该方治疗便秘的作用机制.方法:将50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、硝菔通结方低、中、高剂量组.除正常组外,其余各组大鼠以15mg/kg复方地芬诺酯混悬液灌胃28 d,复制便秘模型.模型成功后,分别给药21d,后取血清和结肠组织,ELISA法检测血清5-HT含量,Q-PCR法检测结肠组织AQP3的mRNA表达.结果:模型组的大鼠血清中5-HT含量与正常组比较明显升高(P＜0.05);药物治疗后,各治疗组血清中5-HT含量均降低(P＜0.05),其中硝菔通结方高剂量组为显著(P＜0.01);模型组结肠组织中AQP3与正常组比较表达升高(P＜0.05),各剂量的硝菔通结方治疗组均降低了结肠组织中AQP3的表达,其中硝菔通结方高剂量组为明显(P＜0.05).结论:硝菔通结方可通过降低血清5-HT含量和降低结肠组织AQP3的表达从而促进肠道动力和调节肠道水液代谢,对功能性便秘发挥治疗作用.
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硝菔通结方对功能性便秘大鼠肠道水液代谢的影响
目的：探讨硝菔通结方对功能性便秘大鼠肠道水液代谢的影响。方法：成年SD雄性大鼠50只，随机分为空白对照组、模型组、硝菔通结方高、中、低剂量组各10只。采用复方地芬诺酯灌胃建立SD大鼠功能性便秘模型，造模成功后各治疗组分别给予不同剂量硝菔通结方灌胃3周。观察各组大鼠首粒黑便的排出时间、粪便含水率、结肠含水率、免疫组化检测大鼠结肠组织中VIP及AQP3的表达。结果：与空白组比较，模型组大鼠粪便量少、质地干硬，首粒黑便排出时间明显延长，粪便含水率和结肠含水率减少，结肠组织中 VIP表达降低、A Q P3的表达升高。与模型组比较，硝菔通结方各剂量组大鼠粪便量增加，质地稀软，首粒黑便时间缩短，大便含水率增多，结肠含水率增多，结肠组织中VIP表达升高，AQP3的表达降低。结论：大鼠功能性便秘的发生与肠道水液代谢障碍有关，硝菔通结方可通过调节肠道水液代谢治疗功能性便秘。
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硝菔通结方对功能性便秘大鼠肠神经递质的影响
目的：探讨硝菔通结方对功能性便秘大鼠肠神经递质 SP 、NO 、5‐HT 、VIP 表达的影响。方法：成年 SD 雄性大鼠50只，随机分为空白对照组、模型组、硝菔通结方高、中、低剂量组，每组各10只。采用复方地芬诺酯灌胃建立 SD 大鼠功能性便秘模型，造模成功后治疗组给予不同剂量硝菔通结方灌胃。观察各组大鼠一般表现，首粒黑便排出时间，Elisa 检测大鼠血清中 SP 、NO 、5‐HT ，Q‐PCR 检测结肠组织中 VIP mRNA 的水平。结果：与空白组比较，模型组大鼠粪便量少，首粒黑便排出时间明显延长；血清中 SP 水平明显降低，NO 、5‐HT 水平明显升高；结肠组织中 VIP mRNA 水平降低。与模型组比较，硝菔通结方各剂量组大鼠粪便量增加，首粒黑便时间缩短；血清中 SP 水平升高，NO 、5‐HT 水平降低；结肠组织中 VIP mRNA 水平升高。大剂量组变化为明显。结论：大鼠便秘的发生可能与肠神经递质异常表达有关，硝菔通结方治疗功能性便秘的机制可能是通过改变相关肠神经递质 SP 、NO 、5‐HP 、VIP 的表达来实现。
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硝菔通结方对功能性便秘大鼠血清内毒素和结肠黏膜菌群的影响
目的 观察硝菔通结方对功能性便秘大鼠血清内毒素和结肠黏膜菌群的影响,探讨硝菔通结方治疗便秘的作用机制.方法 将50只SPF级Wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组、硝菔通结方大、中、小剂量组.除正常组外,其余大鼠以15 mg/kg复方地芬诺酯混悬液灌胃复制便秘模型.造模成功后,给予硝菔通结方水煎剂灌胃治疗,给药30天后,ELISA法检测血清内毒素水平;取结肠黏膜组织,DGGE法检测结肠黏膜菌群.结果 与空白组比较,模型组的大鼠血清中内毒素含量显著升高(P＜0.01);给药治疗后,硝菔通结各治疗组大鼠血清中内毒素含量均降低(P＜0.01),其中硝菔通结方大剂量组为显著;模型组大鼠结肠黏膜菌群多样性和丰富度与空白组比较显著不同(P＜0.01),给药治疗后,各剂量的硝菔通结方治疗组大鼠结肠黏膜菌群多样性和丰富度均明显升高(P＜0.01),其中以硝菔通结方大剂量组为明显.结论 硝菔通结方可通过提高结肠黏膜菌群多样性和丰富度对功能性便秘发挥治疗作用,同时该方还有显著的血清内毒素的作用.
