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艾灸对克罗恩病大鼠结肠肿瘤坏死因子-α含量及艾灸鼠结肠上清液对培养的结肠上皮细胞内紧密连接蛋白及其基因表达的影响
目的:通过观察温和灸、隔药灸对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)体外诱导大鼠结肠上皮细胞紧密连接--咬合蛋白(occludin)、闭合蛋白1(claudin-1)和闭锁蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)及其基因表达的影响,探讨艾灸对肠上皮屏障损伤的修复/保护机制.方法:将SD大鼠随机分成正常组、模型组、温和灸组、隔药灸组和西药组,各12只.采用三硝基苯磺酸制备克罗恩病(Crohn's Disease,CD)大鼠模型.温和灸组与隔药灸组选择"天枢""气海"穴分别予以温和灸和隔药灸,每日1次,共治疗14次;西药组以柳氮磺胺吡嘧溶液灌胃,每日2次,共14次.治疗结束后剖取各CD组大鼠结肠,制备结肠黏膜上清液;正常组纯化并培养结肠上皮细胞建立肠上皮屏障体外模型.将各CD组结肠黏膜上清液分别与正常大鼠结肠上皮细胞混合培养1周,采用ELISA法检测各组结肠黏膜上清液TNF-α含量,Western blot和荧光定量PCR法观察其对CD大鼠体外结肠上皮紧密连接occludin、claudin-1和ZO-1及其mRNA表达的影响.结果:CD模型组较正常组大鼠结肠黏膜上清液中TNF-α含量有显著增高(P<0.01),温和灸、隔药灸和柳氮磺胺吡嘧治疗后TNF-α含量显著降低(均P<0.01),其中温和灸、隔药灸组优于西药组(均P<0.05);与此同时,温和灸、隔药灸和西药组结肠黏膜TNF-α上清液体外诱导大鼠结肠上皮紧密连接occludin、claudin-1和ZO-1及其mRNA表达较模型组有显著增高(P<0.01,P<0.05),且隔药灸、温和灸两组也优于西药组(均P<0.05).结论:艾灸(隔药灸、温和灸)可能是通过降低CD大鼠结肠黏膜异常增高的TNF-α,进而促进或调节结肠上皮紧密连接.ccludin,claudin 1和ZO-1及其mRNA表达,达到修复/保护肠上皮屏障损伤的目的.
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槐定碱、苦参碱和苦豆碱对LPS诱发结肠上皮细胞炎症模型中细胞因子IL-6和TNF-α水平的影响
目的:构建结肠上皮细胞炎症模型,探讨槐定碱、苦参碱和苦豆碱对细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法:将细胞接种12孔板中,每孔接种肠上皮细胞株IEC-62×105个细胞.细菌脂多糖(LPS,1mg·L-1)干预生长良好的IEC-6细胞12 h,建立细胞炎症模型.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测3种生物碱不同浓度对炎症细胞增殖的影响;ELISA法检测给药后细胞上清中IL-6,TNF-α的变化;免疫印迹法检测细胞内IL-6及TNF-α蛋白表达水平.结果:与正常组比较,模型组细胞上清中IL-6,TNF-α水平显著升高,LPS(1 mg·L-1)干预12 h后,IL-6,TNF-α含量分别为(1 899.68±45.80),(148.67 ±5.93) ng·L-1.苦豆碱、槐定碱和苦参碱均可有效减弱LPS诱导的结肠上皮细胞损伤.当生物碱浓度为100μmol· L-1时,槐定碱、苦参碱和苦豆碱均可提高LPS损伤细胞的活性,细胞存活率分别从80.47％提高为91.96％,92.40％,97.23％.此外,这3种生物碱可降低IL-6和TNF-α的含量及其在细胞内的表达.结论:槐定碱、苦参碱和苦豆碱3种生物碱均可通过降低IL-6和TNF-α活性发挥抗炎作用.其中,苦豆碱的抗炎作用佳.
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外泌体对炎症性肠病调节巨噬细胞和肠道上皮细胞的影响
目的 通过检测炎症性肠病(IBD)患者肠外泌体(EVs)对上皮细胞和巨噬细胞的影响,研究EVs对IBD的影响.方法 选择2016年1月至2017年12月收治的40例IBD患者及肠镜未见异常,既往无慢性病史的正常人群20例作为健康对照组(HC组),每例入选者行肠镜检查时收集10 ml肠腔液(LAs),分离EVs.将EVs与结肠上皮细胞株(SW-480细胞系细胞)或者外周血单核细胞来源的巨噬细胞共培养,分别采用qRT-PCR及ELISA法检测LAs中EVs裂解液中细胞因子mRNA表达水平及其蛋白含量,及与EVs共培养的结肠上皮细胞及巨噬细胞吞噬肠EVs后细胞因子mRNA表达水平和蛋白水平,并行巨噬细胞迁移实验探讨EVs对巨噬细胞功能的影响.结果(1)与健康受试者(HC)比较,IBD患者LAs中EVs (IBD-EVs)裂解液中白介素(IL)-6、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA及蛋白表达水平均显著升高,转化生长因子β(TGF-β)及黏蛋白-2(MUC-2)mRNA及蛋白表达水平均显著降低.(2)与IBD-EVs共培养的结肠上皮细胞吞噬EVs后IL-6、IL-8、TNF-α的mRNA表达水平及其蛋白水平均显著高于与HC-EVs共培养的水平,而TGF-β及MUC-2 mRNA及蛋白表达水平均显著低于与HC-EVs共培养时的水平,巨噬细胞吞噬肠腔EVs后细胞因子水平变化与上皮细胞类似,且IBD患者EVs显著提升巨噬细胞的迁移率.结论IBD患者肠腔中释放的EVs的内含物与健康受试者不同,体外实验表明IBD-EVs具有促进肠道上皮细胞、巨噬细胞发生炎症的作用,而该类小体的稳定性及其包含的mRNA及蛋白谱等特性可能作为临床诊断IBD时潜在的标志物.
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溃结灵含药血清对大鼠结肠上皮细胞损伤模型MUC-2及TGF-α含量的影响
目的:观察溃结灵含药血清对结肠上皮细胞损伤模型MUC-2及TGF-α蛋白含量的影响,进一步探讨溃结灵促进肠黏膜损伤修复的机理.方法:TNF-α(50 ng/mL)干预大鼠结肠上皮细胞6h造成细胞损伤模型,采用Elisa方法检测不同浓度渍结灵含药血清对细胞损伤模型MUC-2及TGF-α蛋白含量的影响.结果:①结肠上皮细胞损伤模型组MUC-2蛋白含量较空白对照组升高(P＜0.05);②溃结灵含药血清高剂量组MUC-2蛋白含量较模型对照组升高(P＜0.05);溃结灵含药血清高剂量组TGF-α蛋白含量较模型对照组升高(P＜0.01).结论:溃结灵含药血清可促进TNF-α致结肠上皮细胞损伤模型中MUC-2、TGF-α含量升高,进而促进受损肠黏膜上皮的修复.
